Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD117/c-Kit per WB, FC, ELISA - P05532

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD117/c-Kit

• CD117/c-Kit è un recettore tirosin-chinasico transmembrana a passaggio singolo che lega specificamente il fattore di crescita delle cellule staminali (KITLG/SCF).
• Svolge un ruolo regolatore chiave nell'emopoiesi, nel mantenimento delle cellule staminali, nella gametogenesi, nello sviluppo dei mastociti e nella melanogenesi.
• Dopo il legame con il ligando, KIT attiva molteplici cascate intracellulari, tra cui le vie PI3K/AKT, RAS/MAPK e JAK/STAT, che governano la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione cellulare.
• Il recettore è localizzato principalmente sulla membrana cellulare, ma KIT attivato subisce una rapida internalizzazione nel citoplasma per l'attenuazione o la degradazione del segnale.
• L'splicing alternativo genera diverse isoforme; l'isoforma 3 è espressa prevalentemente nelle cellule staminali ematopoietiche e nelle cellule germinali post-meiotiche, mentre le isoforme 1 e 2 si trovano nelle fasi spermiogenetiche più precoci e nel midollo osseo.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione indotta dal ligante, la glicosilazione N-linker e l'ubiquitinazione, che regolano finemente l'output del segnale e il ricambio del recettore.
• Classificato come proto-oncogena, le mutazioni gain-of-function in KIT sono implicate nei tumori stromali gastrointestinali, nella mastocitosi e in altre neoplasie maligne.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blotting, aspettatevi una banda principale a circa 109 kDa corrispondente al recettore full-length; può essere rilevato anche un frammento processato di ~22 kDa, a seconda del tipo cellulare e delle condizioni di lisi.
• Poiché l'immunogeno copre gran parte del dominio extracellulare, questo anticorpo è particolarmente adatto per la rilevazione tramite citometria a flusso di CD117 di superficie su cellule vive di topo non permeabilizzate.
• Le prestazioni ELISA devono essere ottimizzate con un formato di cattura appropriato; valutate l'abbinamento con un anticorpo di rilevamento che lega un epitopo distinto per evitare la competizione.
• Convalidate la specificità dell'anticorpo utilizzando un controllo positivo noto (ad esempio, cellule di midollo osseo di topo, linee cellulari di mastociti) e un controllo negativo in cui l'espressione di CD117 è assente o silenziata.

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