Anticorpo monoclonale coniglio anti-CD14 per WB - P10810

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD14

• L'antigene di differenziazione dei monociti CD14 (CD14), noto anche come glicoproteina leucina-ricca specifica delle cellule mieloidi, è una glicoproteina di membrana ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) appartenente alla famiglia delle ripetizioni ricche di leucina (LRR).
• Il CD14 agisce come corecettore per il lipopolisaccaride batterico (LPS) in concerto con la proteina legante il LPS (LBP), consegnando il LPS al complesso LY96/TLR4 per avviare le risposte immunitarie innate (PubMed:16148141).
  Riferimenti correlati:
  PMID:16148141
• La segnalazione a valle tramite MyD88, TIRAP e TRAF6 porta all'attivazione di NF-kappa-B, alla secrezione di citochine e alla risposta infiammatoria (PubMed:15895089, PubMed:8612135).
  Riferimenti correlati:
  PMID:15895089, PMID:8612135
• Il CD14 funge da corecettore per gli eterodimeri TLR2:TLR6 e TLR2:TLR1 in risposta a lipopeptidi diacilati e triacilati, rispettivamente; questi complessi attivano la segnalazione dalla superficie cellulare e trafficano verso l'apparato di Golgi in modo dipendente dai lipid rafts.
• Come recettore accessorio, il CD14 lega le lipoproteine LprA, LprG e LpqH di M. tubercolosi in congiunzione con TLR2 e TLR1, modulando le funzioni delle cellule che presentano l'antigene (PubMed:19362712).
  Riferimenti correlati:
  PMID:19362712
• Il CD14 lega anche le LDL elettro-negative (LDL(-)) e media il rilascio di citochine indotto dalle LDL(-).
• La localizzazione subcellulare include la membrana cellulare, i raft di membrana, l'apparato di Golgi e può essere secreto in forma solubile.
• Rilevato sui macrofagi peritoneali, sui macrofagi alveolari polmonari, sui macrofagi dendritici e sui macrofagi polmonari a livello proteico (PubMed:8612135, PubMed:19362712).
  Riferimenti correlati:
  PMID:8612135, PMID:19362712

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde al dominio extracellulare (residui 18-345) del CD14 di topo, che comprende la regione delle ripetizioni ricche di leucina; questo design può essere utile per rilevare sia le forme legate alla membrana che quelle solubili del CD14.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto del CD14 è di circa 39 kDa; tuttavia, a causa della glicosilazione, la banda osservata potrebbe migrare leggermente più in alto. Considerare l'uso di un tampone di blocco e di lisi adeguato per preservare gli epitopi.
• La citometria a flusso può essere applicata per analizzare l'espressione del CD14 sulla superficie cellulare dei macrofagi e dei monociti; assicurarsi di utilizzare un gating appropriato e controlli isotipici per i campioni di topo.
• L'ELISA può essere adatto per rilevare il CD14 solubile o per studiare le interazioni di legame con il LPS; ottimizzare le condizioni di rivestimento e gli anticorpi di rilevamento per il formato specifico dell'analisi.
• Validare l'anticorpo nel sistema di campioni pertinente, come i macrofagi peritoneali di topo o le popolazioni di macrofagi polmonari, per confermare la reattività e la specificità.

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