Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-CD16b per WB, FC, ELISA - O75015

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD16b

• CD16b (FcγRIIIB) è un recettore a bassa affinità per la regione Fc delle immunoglobuline gamma, codificato dal gene FCGR3B. È una glicoproteina ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) senza dominio transmembrana, questo lo distingue da FcγRIIIA.
• Il recettore lega IgG complesse o aggregate e IgG monomeriche, ma a differenza di FcγRIIIA non media la citotossicità cellulare dipendente da anticorpi (ADCC) o la fagocitosi; funge probabilmente da recettore esca che intrappola gli immunocomplessi nella circolazione periferica senza attivare i neutrofili.
• CD16b è espresso specificamente dai leucociti polimorfonucleati (neutrofili) e dagli eosinofili stimolati, il che sottolinea il suo ruolo nella sorveglianza immunitaria innata sui granulociti.
• Subcellularmente, CD16b si trova sulla membrana cellulare e può essere rilasciato in forma secreta, tramite il taglio del suo ancoraggio GPI.
• La proteina contiene due domini simili alle immunoglobuline ed è ampiamente glicosilata; un peso molecolare previsto di circa 26 kDa (proteina centrale 26.243 Da) viene spesso osservato come banda diffusa a causa della glicosilazione.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono un peptide segnale N-terminale (aa 1-18), il dominio extracellulare di legazione all'IgG (aa 20-208, utilizzato come immunogeno) e un sito di attacco all'ancora GPI C-terminale. Diversi alias (CD16, FCG3, FCGR3, FCR-10, FCRIII) riflettono la nomenclatura storica.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre l'intero dominio extracellulare di legazione all'IgG (aa 20-208) di CD16b umano, ed è particolarmente adatto per rilevare sia la proteina nativa sia quella denaturata in tutte le applicazioni.
• Per Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno ai 26 kDa in condizioni riducenti; a causa della glicosilazione possono verificarsi smearing o bande diffuse: convalidare con controlli positivi appropriati (ad es. lisati di neutrofili) e considerare la deglicosilazione se è richiesta una banda netta.
• Per la citometria a flusso (FC), utilizzare un anticorpo secondario coniugato con fluoroforo compatibile per rilevare CD16b superficiale su neutrofili vivi non fissati; evitare metodi di fissazione che potrebbero alterare l'integrità della proteina ancorata al GPI.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; per i formati sandwich si consiglia l'abbinamento con un clone anti-CD16b non competitivo, e le condizioni di reazione devono essere ottimizzate con proteina CD16b ricombinante o purificata.
• La reattività crociata è limitata all'uomo; non ci si aspetta reattività con CD16b di topo o ratto, quindi scegliere un sistema modello appropriato o convalidare con campioni umani.

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