Anticorpo monoclonale anti-CD4 per citometria a flusso - P01730

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD4

• Il CD4 è una glicoproteina transmembrana e membro della superfamiglia delle immunoglobuline, composta da una regione extracellulare con quattro domini simili a Ig (D1–D4), un'elica transmembrana a passaggio singolo e una breve coda citoplasmatica. È espresso principalmente sulla superficie delle cellule T helper, nonché su monociti, macrofagi, cellule dendritiche e cellule NK.
• Nelle cellule T helper, il CD4 funge da corecettore per le molecole MHC di classe II. Si lega a regioni non polimorfiche del MHC di classe II sulle cellule presentanti l'antigene, stabilizzando l'interazione tra il recettore delle cellule T (TCR) e i complessi peptide-MHC, essenziale per il riconoscimento dell'antigene e l'attivazione delle cellule T.
• A seguito dell'ingaggio del TCR, il CD4 recluta la chinasi della famiglia Src LCK tramite la sua coda citoplasmatica nelle vicinanze del complesso TCR-CD3. LCK fosforila i motivi di attivazione basati sulla tirosina dei recettori immuni (ITAM) sulle catene CD3, innescando cascate di segnalazione intracellulare che portano alla proliferazione delle cellule T, alla produzione di citochine e alla differenziazione.
• Oltre al suo ruolo nell'immunità adattiva, il CD4 agisce come recettore primario per il virus dell'immunodeficienza umana di tipo 1 (HIV-1) tramite l'interazione con la glicoproteina dell'involucro virale gp120. Serve anche come recettore per l'herpesvirus umano 7 (HHV-7). Le proteine Vpu e Nef dell'HIV-1 downregolano l'espressione superficiale del CD4 per facilitare l'uscita virale e l'evasione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:12089508 PMID:16331979 PMID:2214026 PMID:17346169 PMID:7909607
• Il CD4 è modificato post-traduzionalmente da glicosilazione N-legata, formazione di legami disolfuro, palmitoilazione su una cisteina giustamembrana e fosforilazione da parte di LCK. Queste modifiche regolano il ripiegamento proteico, la localizzazione di membrana e la trasduzione del segnale.
• L'espressione del CD4 è una caratteristica distintiva delle cellule T helper ed è comunemente utilizzata come marcatore immunofenotipico per l'identificazione dei sottotipi di cellule T. La sua densità superficiale può variare con lo stato di attivazione e differenziazione cellulare.
• Nei macrofagi e nelle cellule NK, l'ingaggio del CD4 può innescare la differenziazione, l'espressione di citochine e la migrazione cellulare attraverso percorsi indipendenti da TCR/LCK, evidenziando la sua versatilità funzionale oltre la segnalazione delle cellule T.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è coniugato direttamente ad , un fluoroforo rosso lontano luminoso e fotostabile, pronto per l'uso in citometria a flusso. Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di colorazione ottimale per il proprio tipo di cellule specifico e le condizioni sperimentali (intervallo tipico: 0,1–1 µg per 1×10^6 cellule).
• Dato che l'espressione superficiale del CD4 è elevata sulle cellule T helper a riposo, includere controlli di isotipo appropriati e la discriminazione cellule vive/morte per garantire una colorazione specifica. Per pannelli multicolor, combinare con anti-CD3 e anti-CD8 per analizzare a fondo i sottotipi di cellule T.
• L'anticorpo cross-reagisce sia con il CD4 umano che con quello del cinomolgo, rendendolo adatto a studi che coinvolgono modelli di primati non umani. Validare l'anticorpo nella propria matrice di campioni specifica e nel protocollo di fissazione/permeabilizzazione se è richiesta la colorazione intracellulare.
• L'immunogeno è CD4 umano ricombinante, probabilmente corrispondente al dominio extracellulare. Pertanto, l'anticorpo può riconoscere preferenzialmente il CD4 nativo, non denaturato; le condizioni denaturanti (es. western blotting in condizioni riducenti) potrebbero richiedere validazione.
• Per applicazioni oltre la citometria a flusso, come l'istochimica immunologica o l'immunoprecipitazione, si raccomanda l'ottimizzazione e la verifica indipendente a causa della mancanza di dati del produttore.

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