Anticorpo policlonale anti-CD4 coniglio per WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P01730

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD4

• Il CD4 è una glicoproteina integrale di membrana di 51 kDa, nota anche come antigene di superficie delle cellule T T4/Leu-3, appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline. Contiene quattro domini extracellulari simili alle Ig (D1–D4), un'elica transmembrana singola e una coda citoplasmatica che interagisce con la chinasi Src LCK.
• Nelle cellule T helper, il CD4 funge da corecettore per le molecole di classe II del MHC. Lega simultaneamente il recettore delle cellule T (TCR) e il MHC di classe II sulle cellule presentanti l'antigene, reclutando LCK per fosforilare i substrati del complesso TCR-CD3, il che innesta cascate di segnali che portano all'attivazione delle cellule T, alla produzione di linfochine e alla proliferazione.
• Il CD4 è critico per lo sviluppo dei timociti e la differenziazione delle cellule T helper. Innesca anche la maturazione da monociti a macrofagi, sottolineando il suo ruolo nell'immunità innata e adattativa.
• Oltre alle cellule T, il CD4 è espresso nei macrofagi, nelle cellule dendritiche e nelle cellule NK, dove modula la differenziazione, l'espressione delle citochine e la migrazione cellulare attraverso vie indipendenti da TCR/LCK.
• Il CD4 serve come recettore primario per il virus dell'immunodeficienza umana-1 (HIV-1) tramite il suo dominio D1, facilitando l'ingresso virale. È anche un recettore per l'Herpesvirus umano 7 (HHV-7). L'infezione da HIV-1 porta alla downregulation del CD4 da parte della proteina virale Vpu. Riferimenti correlati: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• La localizzazione subcellulare è predominante alla membrana cellulare, coerente con la sua funzione di recettore di superficie. Una forma solubile può essere rilasciata dopo l'attivazione delle cellule T.
• È altamente espresso nelle cellule T helper, ma si trova anche in altre cellule immunitarie come macrofagi, cellule dendritiche e cellule NK. L'espressione del CD4 è un marcatore definitivo per l'identificazione delle cellule T helper.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-legata, i ponti disolfuro all'interno dei domini Ig e la palmitoilazione alla coda citoplasmatica, che possono modulare la localizzazione nei microdomini di membrana e la segnalazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre il dominio extracellulare (aa 26‑200) del CD4 umano, coprendo i siti di legame del MHC di classe II e della gp120 dell'HIV-1. Questo design può consentire il rilevamento del CD4 a lunghezza intera in western blot denaturanti nonché delle conformazioni native in immunofluorescenza ed ELISA.
• Per il western blot, è prevista una banda intorno a 51 kDa in condizioni riducenti. La glicosilazione può causare l'apparenza di un peso molecolare più elevato (55–60 kDa). Includere appropriati controlli positivi (es. lisati di Jurkat o PBMC umani) e considerare l'uso di un agente riducente.
• La reattività crociata riportata con il CD4 di topo e ratto dovrebbe essere verificata nei modelli sperimentali specifici. L'allineamento delle sequenze mostra circa il 70% di identità nella regione extracellulare; si raccomanda la titolazione dell'anticorpo primario e un'attenta validazione.
• L'anticorpo può essere utilizzato in formati di immunofluorescenza indiretta (IF/ICC) ed ELISA. Assicurarsi di utilizzare protocolli appropriati di fissazione e permeabilizzazione per l'IF; per la colorazione di superficie cellulare, evitare la permeabilizzazione. Validare nel tipo di cellula o tessuto rilevante.
• Quando utilizzato per studi funzionali (es. blocco del legame dell'HIV‑1), notare che la natura policlonale può produrre risultati variabili; per un blocco epitopo-specifico coerente, possono essere preferiti formati monoclonali.

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