Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD45 per FC, ELISA - P08575

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD45

• CD45, noto anche come antigene leucocitario comune (L-CA) o T200, è una tirosina-proteina fosfatasi di tipo recettore (PTPRC) che svolge un ruolo critico nella segnalazione delle cellule immunitarie.
• Funziona come regolatore positivo della co-attivazione dei linfociti T dopo il legame con DPP4. Il primo dominio PTPasi ha attività enzimatica, mentre il secondo sembra influenzare la specificità del substrato del primo. Dopo l'attivazione dei linfociti T, recluta e defosforila SKAP1 e FYN. Defosforila LYN, modulandone così l'attività. Riferimenti correlati: PMID:35767951
• CD45 interagisce con CLEC10A all'interfaccia cellula presentante l'antigene–linfocita T, contribuendo alla modulazione delle soglie di attivazione dei linfociti T e prevenendo l'autoreattività.
• Isoforme prodotte da splicing alternativo (dall'isoforma 1 alla 8) sono espresse in modo differenziale nei timociti, con le isoforme 1,2,3,5,7 rilevate e altre no. I diversi pesi proteici (131–147 kDa) riflettono questa diversità isoformica.
• A livello subcellulare, CD45 si localizza sulla membrana cellulare, nei "raft" di membrana e nella sinapsi immunologica, in linea con il suo ruolo nella segnalazione prossimale del recettore dei linfociti T.
• Come fattore dell'ospite, CD45 agisce come recettore per la proteina UL11 del citomegalovirus umano, mediando il legame virale ai linfociti T e il conseguente compromissione della proliferazione e segnalazione dei linfociti T.
• Le modificazioni post-traduzionali includono una pesante glicosilazione, fosforilazione, e la presenza di un peptide segnale, un'elica transmembrana e domini fosfatasi in tandem.
• Espresso ampiamente su tutte le cellule ematopoietiche nucleate, CD45 è essenziale per lo sviluppo e l'attivazione dei linfociti, rendendolo un marcatore diagnostico chiave per l'identificazione dei leucociti.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato (amminoacidi 26–577) copre la regione extracellulare del CD45 umano, inclusi domini specifici di multiple isoforme; questa ampia regione suggerisce che l'anticorpo possa riconoscere varie isoforme di CD45 in conformazioni native.
• Per la citometria a flusso (FC), considerare di titolare l'anticorpo su sottopopolazioni leucocitarie umane rilevanti (es. PBMC, cellule Jurkat) per determinare le concentrazioni ottimali di colorazione; includere controlli isotipo per valutare il legame aspecifico.
• Per applicazioni ELISA, valutare formati diretti o di cattura utilizzando proteina CD45 ricombinante o lisati cellulari; confermare linearità e sensibilità con curve standard.
• Poiché CD45 è pesantemente glicosilato, assicurarsi che il legame dell'anticorpo non sia ostacolato dalla glicosilazione in certi tipi di campione; condizioni denaturanti possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo.
• L'anticorpo viene fornito su ghiaccio; aliquottare e conservare alle temperature consigliate (es. -20°C) per mantenerne la stabilità ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento.

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