Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD59 per WB, ELISA - P13987

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Background Biologico: Funzione e Localizzazione di CD59

• La glicoproteina CD59, nota anche come protectina, HRF20, MACIF o MIRL, è una glicoproteina di superficie cellulare ancorata a GPI, espressa principalmente sulle cellule umane per proteggere dalla lisi mediata dal complemento.
• Funziona come un potente inibitore del complesso di attacco alla membrana (MAC) del complemento, prevenendo danni durante l'attivazione del complemento bloccando le fasi finali della formazione del poro. Riferimenti correlati: PMID:11882685 PMID:1698710 PMID:2475111
• Meccanicamente, CD59 si lega alle regioni beta-hairpin dei componenti C8α e C8β del MAC in assemblaggio, formando un foglietto beta intermolecolare che impedisce l'incorporazione di multiple molecole di C9 necessarie per la formazione del poro osmolitico. Riferimenti correlati: PMID:11882685 PMID:1698710 PMID:36797260
• Una forma solubile di CD59, trovata nelle urine e in altri fluidi corporei, mantiene l'attività di legame al complemento ma mostra una capacità inibitoria del MAC notevolmente ridotta rispetto alla forma legata alla membrana.
• A livello subcellulare, CD59 è ancorata alla membrana cellulare tramite un gruppo GPI e può anche essere trovata in forme secrete.
• La proteina contiene caratteristiche strutturali chiave tra cui legami disolfuro multipli e siti di glicazione, che contribuiscono alla sua stabilità e funzione.
• Le varianti genetiche in CD59 sono associate ad anemia emolitica ereditaria, sottolineando il suo ruolo critico nel proteggere gli eritrociti dall'attacco del complemento.
• Lo splicing alternativo produce multiple isoforme di CD59, potenzialmente modulandone la funzione o la localizzazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno per questo anticorpo è un peptide sintetico che abbraccia gli amminoacidi 49–128 del CD59 umano, mirando a una regione extracellulare, rendendolo adatto a rilevare la forma nativa legata alla membrana.
• Per il Western Blot, ci si aspetta una banda principale a circa 14 kDa per lo scheletro peptidico non glicosilato; tuttavia, la glicosilazione e l'aggiunta dell'ancora GPI possono risultare in specie di peso molecolare più alto, quindi validare con appropriati controlli positivi (es. siero umano o membrane eritrocitarie).
• Nelle applicazioni ELISA, considerare di accoppiare questo anticorpo monoclonale con un clone diverso che bersagli un epitopo distinto per sviluppare un saggio immunoenzimatico sandwich sensibile per la quantificazione di CD59.
• Ottimizzare sempre la diluizione dell'anticorpo e le condizioni sperimentali nella matrice del campione rilevante per garantire la specificità e minimizzare il fondo.

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