Anticorpo Monoclonale Rabbit Anti-CD64 per WB, ELISA - P12314

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD64

• CD64, noto anche come FcγRI, è il recettore ad alta affinità per la regione Fc dell'immunoglobulina gamma (IgG). È codificato dal gene FCGR1A nell'uomo e appartiene alla superfamiglia delle immunoglobuline.
• Questo recettore svolge un ruolo fondamentale nel collegare l'immunità umorale e cellulare legando l'IgG con elevata affinità, permettendo a monociti e macrofagi di riconoscere ed eliminare bersagli opsonizzati da IgG.
• CD64 media potenti funzioni effettrici, inclusa la citotossicità cellulare anticorpo-dipendente (ADCC) contro cellule infettate da virus, contribuendo quindi alle risposte immunitarie antivirali.
• La proteina è composta da tre domini extracellulari simili alle immunoglobuline, una singola elica transmembrana e una breve coda citoplasmatica. L'immunogeno utilizzato corrisponde alla regione extracellulare (amminoacidi 16–288), che copre i domini di legame dell'IgG.
• CD64 è espresso specificamente sulla superficie di monociti e macrofagi, in linea con il suo ruolo nella sorveglianza immunitaria innata e nella presentazione degli antigeni.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione N-linked e fosforilazione. L'intervallo di peso molecolare osservato (45–75 kDa) riflette l'eterogeneità della glicosilazione.
• Lo splicing alternativo genera più isoforme, alcune delle quali possono essere secrete o funzionare come recettori solubili.
• Come recettore chiave dell'immunità innata e trigger per l'ADCC, CD64 è un biomarcatore convalidato per l'attivazione di monociti/macrofagi e un bersaglio terapeutico nell'immunoterapia contro il cancro.

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante che copre l'intero dominio extracellulare (aa 16–288), quindi questo anticorpo riconosce probabilmente sia la conformazione nativa sia epitopi denaturati. Per Western blot, il pattern di bande osservato può presentarsi come una banda larga o più bande tra 45 e 75 kDa a causa della glicosilazione variabile; utilizzare un carico proteico appropriato e condizioni riducenti adeguate.
• Per ELISA, prendere in considerazione l'utilizzo di proteina ricombinante FcγRI o lisati cellulari da linee cellulari monocitarie umane (ad esempio THP-1) come fonte di antigene. Convalidare la specificità del saggio con controlli isotipici e blocco con IgG umane in eccesso.
• Poiché l'espressione di CD64 è limitata a monociti/macrofagi, assicurarsi che i campioni di tessuto o cellulari siano arricchiti per questa popolazione per ottenere segnali robusti. In preparazioni di leucociti misti, la co-colorazione con CD14 può aiutare a confermare l'identità dei monociti.
• Si prevede che l'anticorpo reagisca in modo crociato con CD64 umano ma non con altri recettori Fcγ (CD32, CD16). Se è necessaria una reattività più ampia, eseguire test su proteine ricombinanti di diversi membri della famiglia FcγR.
• Considerato il suo ruolo nell'ADCC, questo anticorpo può essere utile in saggi funzionali che monitorano l'uccisione mediata da monociti; tuttavia, le sue proprietà bloccanti o attivanti devono essere determinate sperimentalmente.

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