Anticorpo monoclonale coniglio anti-CD68 per WB, IF-P, FC (intra), ELISA - P34810

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD68

• Il CD68, noto anche come macrosialina, GP110, LAMP4 e SCARD1, è una proteina transmembrana di tipo I pesantemente glicosilata appartenente alla famiglia delle proteine di membrana associate ai lisosomi (LAMP).
• È localizzato prevalentemente sulle membrane degli endosomi e dei lisosomi, ma può riciclare sulla superficie cellulare, consentendo una rapida presentazione sulla membrana plasmatica nei macrofagi.
• La proteina svolge un ruolo critico nella fagocitosi, mediando il metabolismo lisosomiale intracellulare del materiale inglobato e partecipando alle interazioni extracellulari con patogeni e altre cellule.
• Il CD68 si lega a lectine o selectine specifiche di tessuto e organo, il che facilita l'omoscrizione di sottopopolazioni di macrofagi in siti anatomici particolari e supporta l'adesione e la migrazione dei macrofagi.
• Si ritiene che il rapido riciclo del CD68 dagli endosomi e dai lisosomi alla membrana plasmatica aiuti i macrofagi a strisciare su substrati che recano selectine o su altre cellule.
• Sebbene sia fortemente espresso nei monociti del sangue e nei macrofagi tissutali, il CD68 viene rilevato anche nei linfociti, nei fibroblasti, nelle cellule endoteliali e in molte linee cellulari tumorali, dove può promuovere la disseminazione delle cellule tumorali legandosi alle selectine vascolari.
• La proteina presenta domini N-terminali multipli simili alla mucina, un'elica transmembrana singola e una breve coda citoplasmatica, con estesa glicosilazione N- e O- e diversi legami disolfuro intramolecolari.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre i residui 100–200 del CD68 umano (NP_001242.2). La conservazione della sequenza in questa regione è probabilmente alla base della reattività crociata con topo e ratto.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto dello scheletro non glicosilato è di circa 37 kDa, ma le forme pesantemente glicosilate spesso migrano a pesi molecolari apparenti più elevati (80–110 kDa). Si consiglia un blocco appropriato e l'uso di marcatori di peso molecolare.
• Nell'immunofluorescenza (IF-P) e nel citofluorimetria intracellulare (FC), la permeabilizzazione è essenziale poiché il CD68 risiede principalmente nei compartimenti endosomiali e lisosomiali; la colorazione di superficie richiede la considerazione della dinamica di riciclo.
• Le prestazioni ELISA dipendono dall'accessibilità dell'epitopo; gli effetti della matrice e le condizioni di rivestimento dovrebbero essere ottimizzati, poiché la forte glicosilazione può mascherare o alterare il legame dell'anticorpo.
• Data l'ampia espressione nelle linee monocitiche/macrofagiche, includere controlli positivi rilevanti (es. cellule THP-1 o RAW 264.7) e controlli isotipici per confermare la specificità nel sistema campione desiderato.

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