Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD68 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della CD68

• La CD68, nota anche come macrosialina, GP110, LAMP4 o SCARD1, è una proteina transmembrana di tipo I fortemente glicosilata appartenente alla famiglia delle glicoproteine di membrana associate ai lisosomi/endosomi (LAMP). Contiene un dominio simile alla mucina e un'elica transmembrana.
• L'splicing alternativo del gene CD68 genera molteplici isoforme, che possono contribuire alla diversità funzionale in diversi tipi cellulari o compartimenti cellulari.
• La CD68 svolge un ruolo centrale nelle attività fagocitiche dei macrofagi tissutali, partecipando sia al metabolismo lisosomiale intracellulare sia alle interazioni cellulari extracellulari e cellula-patogeno. Si lega a lectine o selectine specifiche per tessuto e organo, facilitando così l'homing dei sottogruppi di macrofagi verso siti specifici.
• La proteina subisce un riciclo rapido tra endosomi, lisosomi e membrana cellulare, un processo dinamico che potrebbe consentire ai macrofagi di migrare su substrati o altre cellule che esprimono selectine.
• Subcellularmente, la CD68 si localizza principalmente sulla membrana cellulare, la membrana dell'endosoma e la membrana del lisosoma, in linea con i suoi ruoli nel traffico vescicolare e nell'adesione superficiale.
• La CD68 è altamente espressa nei monociti del sangue e nei macrofagi tissutali. È presente, in misura minore, anche nei linfociti, fibroblasti, cellule endoteliali e numerose linee cellulari tumorali. Nei tumori, l'espressione di CD68 può promuovere l'adesione mediata da selectine all'endotelio vascolare, potenzialmente favorendo la disseminazione metastatica.
• Le modifiche post-traduzionali comprendono un'estesa glicosilazione N- e O-linked, che spiega perché il peso molecolare apparente della proteina sulla SDS-PAGE è superiore ai 37 kDa previsti. La proteina contiene inoltre legami disolfuro e un peptide segnale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide sintetico (aa 100-200 della CD68 umana), il che indica che l'anticorpo riconosce un epitopo lineare. Per il western blotting, le condizioni standard di riduzione e denaturazione dovrebbero essere adatte; tuttavia, a causa della forte glicosilazione, la banda osservata potrebbe migrare al di sopra dei 37 kDa previsti. Se necessario, si consiglia di utilizzare enzimi deglicosilanti per confermare la specificità.
• Per l'immunofluorescenza su sezioni paraffinate (IF-P) e l'immunoistochimica (IHC-P), si consiglia il recupero dell'antigene poiché la CD68 è una proteina di membrana spesso localizzata in compartimenti intracellulari. Ottimizzare la fissazione (ad esempio, PFA al 4% o formalina) e la permeabilizzazione per garantire l'accesso all'epitopo negli endosomi/lisosomi.
• Quando si utilizza questo anticorpo in ELISA, convalidare le prestazioni contro la proteina CD68 ricombinante o lisati di linee cellulari che esprimono CD68 (ad esempio, monociti/macrofagi THP-1) per confermare sensibilità e specificità.
• Poiché la CD68 è un marcatore per i macrofagi, includere controlli positivi (ad esempio, lisati di macrofagi umani) e negativi (ad esempio, campioni knockout per CD68 o controlli isotipici) appropriati in tutti gli esperimenti per verificare la specificità per il bersaglio.

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