PolimAb® coniglio anti-CD68 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P34810 / P31996

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD68

• La macrosialina (CD68) è una glicoproteina transmembrana fortemente glicosilata appartenente alla famiglia delle proteine di membrana associate ai lisosomi (LAMP), nota anche come Lamp4, gp110 e Scard1. La proteina core ha un peso molecolare calcolato di ~37 kDa, ma l'estesa glicosilazione N- e O-linked determina una dimensione apparente di 70–130 kDa in SDS-PAGE.
• CD68 è espresso prevalentemente sulle membrane endosomiali e lisosomiali dei monociti e dei macrofagi tissutali, dove partecipa al metabolismo fagocitario e lisosomiale intracellulare.
• Leggendo le lectine o le selectine tessuto- e organo-specifiche, CD68 facilita l'homing dei macrofagi verso i siti di infiammazione o danno e può consentire la motilità cellulare su substrati rivestiti di selectine attraverso un rapido riciclo tra i compartimenti endolisosomiali e la membrana plasmatica.
• Oltre che sui macrofagi, CD68 è espresso a livelli inferiori nei linfociti, fibroblasti, cellule endoteliali e in molte linee cellulari tumorali, potenzialmente favorendo l'adesione delle cellule tumorali all'endotelio vascolare e la disseminazione metastatica.
• Le modifiche post-traduzionali comprendono la formazione di legami disolfuro, un'elevata glicosilazione e un peptide segnale cleavabile, che contribuiscono alla sua maturazione e al traffico di membrana.
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme di CD68, e il suo repertorio funzionale viene ulteriormente ampliato attraverso le interazioni con componenti della matrice extracellulare e recettori di adesione cellulare.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante che copre sia CD68 umano che murino, indicando un'ampia reattività crociata; ciononostante, i ricercatori devono convalidare la reattività nei loro specifici sistemi di campionamento.
• Per Western blot (WB), ci si aspetta una banda larga compresa tra 70 e 130 kDa a causa della variabilità della glicosilazione; includere un controllo positivo come lisati di macrofagi e considerare l'uso di gel SDS-PAGE all'8–12% per una risoluzione ottimale.
• In IHC-P e IF/ICC, una rilevazione efficace può richiedere passaggi di recupero dell'antigene (a base di calore o enzimatica) e permeabilizzazione per accedere alla localizzazione intracellulare endosomiale/lisosomiale.
• Per ELISA, l'abbinamento con un anticorpo di rilevazione compatibile è essenziale; CamelBio offre coppie di anticorpi convalidate per supportare lo sviluppo rapido del test.
• Poiché CD68 è un marcatore di macrofagi ben consolidato, la doppia colorazione con altri marcatori di lignaggio (es. CD163, CD11b) può aiutare a delimitare i sottogruppi di macrofagi nelle sezioni di tessuto.

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