Anticorpo policlonale di coniglio anti-CD74 per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P04233

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD74

• CD74, noto anche come catena gamma dell'antigene di istocompatibilità HLA di classe II o catena invariante (Ii), è un chaperone fondamentale nel processo di presentazione e lavorazione degli antigeni della MHC di classe II. Funge da recettore sulla superficie cellulare per il fattore inibitorio della migrazione dei macrofagi (MIF).
• La proteina si lega al sito di legame peptidico degli eterodimeri alfa/beta della MHC di classe II, formando un complesso alfa-beta-CLIP che impedisce il caricamento prematuro del peptide, finché HLA-DM non facilita il rilascio di CLIP nell'endosoma.
• CD74 stabilizza la conformazione della catepsina L matura (CTSL) legandosi al suo sito attivo, agendo come chaperone per mantenere un pool di enzima attivo nei compartimenti endocitici e nello spazio extracellulare delle cellule presentanti l'antigene.
• L'isoforma p41 di CD74 dimostra attività antivirale bloccando l'ingresso endosomiale del virus Ebola e dei coronavirus, incluso SARS-CoV-2, attraverso l'interruzione della lavorazione della glicoproteina virale mediata dalle catepsine. Riferimenti correlati: PMID:32855215
• Subcellulare, CD74 si trova sulla membrana cellulare, nel reticolo endoplasmatico, nell'apparato di Golgi, nella rete trans-Golgi, negli endosomi e nei lisosomi; viene anche secreta.
• Nelle cellule B, due isoforme principali rappresentano rispettivamente il 10% e il 70% dell'espressione totale di CD74.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, glicosilazione, attacco di proteoglicani e formazione di legami disolfuro, come indicato nell'annotazione di UniProt.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 73-232 di CD74 umano (NP_004346.1) e copre la regione CLIP; verificare la conservazione della sequenza se si utilizza in specie diverse da umano e ratto.
• Per Western blot (WB), il peso molecolare previsto è di 34 kDa, ma la glicosilazione e le varianti isoformiche possono causare spostamenti delle bande; convalidare la rilevazione nel proprio sistema sperimentale.
• Nell'immunoistochimica su paraffina (IHC-P), si consiglia di ottimizzare i protocolli di recupero dell'antigene, poiché CD74 si localizza in più compartimenti intracellulari.
• Per immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), le condizioni di permeabilizzazione devono essere testate a causa della localizzazione combinata di CD74 sulla membrana e intracellulare.
• Quando si utilizza l'ELISA, tenere presente che CD74 può essere secreta; si raccomanda un'adeguata preparazione del campione e la convalida del test.

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