Anticorpo policlonale anti-CD8A per WB, IHC-P, ELISA - P01732

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD8A

• Il CD8A codifica la catena alfa della glicoproteina di superficie delle cellule T CD8, nota anche come T8/Leu-2, che è un corecettore per le molecole di classe I del MHC. La proteina CD8 esiste come un eterodimero legato da ponti disolfuro tra le catene alfa/CD8A e beta/CD8B o, meno comunemente, come un omodimero CD8A.
• Il CD8A è essenziale per la risposta immunitaria. Nelle cellule T, interagisce con il recettore delle cellule T (TCR) e i complessi MHC di classe I:peptide sulle cellule presentanti l'antigene, reclutando la chinasi Src LCK per avviare le vie di segnalazione che portano all'attivazione delle cellule T, alla proliferazione e alla differenziazione in linfociti T citotossici (CTL).
• Il CD8A consente ai CTL di riconoscere ed eliminare le cellule infette e tumorali. La cascata di segnalazione intracellulare innescata dalla fosforilazione CD8A-LCK promuove la produzione di linfochine, la motilità, l'adesione e la lisi delle cellule bersaglio.
• Sulle cellule natural killer (NK), gli omodimeri CD8A forniscono un meccanismo di sopravvivenza che facilita la coniugazione e la lisi di più cellule bersaglio. Gli omodimeri CD8A supportano anche la sopravvivenza e la differenziazione dei linfociti attivati in cellule T di memoria CD8+.
• Il CD8A è espresso sulle cellule T derivate dal timo, un sottoinsieme di cellule NK, cellule T di memoria, linfociti intraepiteliali, monociti e cellule dendritiche. La sua espressione può essere indotta sulle cellule dendritiche plasmacitoidi dopo stimolazione con virus dell'herpes simplex-1.
• La proteina è una glicoproteina di membrana integrale con un dominio transmembrana a passaggio singolo e una forma secreta prodotta per splicing alternativo. Contiene un dominio simile a immunoglobulina ed è modificata da legami disolfuro, palmitoilazione e glicosilazione N-legata.
• Le parole chiave associate al CD8A includono immunità adattiva, splicing alternativo, membrana cellulare, variante della malattia (implicandola nell'immunodeficienza), legame disolfuro, glicoproteina, dominio immunoglobulinico, lipoproteina, palmitato, secreto ed elica transmembrana.
• Il peso molecolare della proteina matura è di circa 25,7 kDa, coerente con la dimensione della banda osservata di 26 kDa in condizioni riducenti nell'analisi Western blot.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo policlonale corrisponde agli amminoacidi 22-182 del CD8A umano, che si estende sul dominio extracellulare simile a immunoglobulina. Questa regione è molto probabile che sia accessibile sulla superficie cellulare, rendendo l'anticorpo adatto per applicazioni che riconoscono la proteina nativa.
• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno a 26 kDa. L'anticorpo può rilevare sia le forme glicosilate che quelle non glicosilate. Si raccomandano condizioni riducenti per risolvere il monomero.
• Per l'immunoistochimica su sezioni paraffinate (IHC-P), le condizioni ottimali di recupero dell'antigene (es. tampone citrato, pH 6,0) dovrebbero essere determinate empiricamente. La natura policlonale può fornire una forte amplificazione del segnale ma potrebbe anche aumentare il rumore di fondo; i passaggi di blocco dovrebbero essere ottimizzati.
• Come anticorpo policlonale, riconosce più epitopi, il che può essere vantaggioso per gli saggi ELISA, potenzialmente fungendo sia da reagente di cattura che di rilevamento. L'adsorbimento incrociato contro le proteine del topo garantisce la reattività con il CD8A di topo, espandendo la sua utilità negli studi su modelli murini.

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