Anticorpo monoclonale coniugato di coniglio anti-CD95 per ELISA, FC - P25446

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del CD95

• Il CD95 (FAS, Apo-1) è un membro della superfamiglia dei recettori del fattore di necrosi tumorale, una proteina transmembrana che media l'apoptosi legandosi al suo ligando FASLG.
• Il dominio di morte intracellulare del recettore recluta FADD e caspasi-8, formando il complesso di segnalazione che induce la morte (DISC) che innesca le cascate apoptotiche.
• L'apoptosi mediata da FAS è fondamentale per la tolleranza periferica e il suicidio indotto da antigene delle cellule T mature.
• Localizzato sulla membrana cellulare e nei rafts di membrana, il CD95 è espresso in vari tessuti di topo, inclusi timo, fegato, polmone, cuore e ovaio adulto.
• Le modificazioni post-traduzionali includono glicosilazione, lipidazione (palmitato) e fosforilazione; la proteina contiene legami disolfuro e un peptide segnale.
• La proteina matura ha un peso molecolare previsto di circa 37 kDa, che può apparire più alto in condizioni riducenti a causa della glicosilazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (aa 22-169) comprende il dominio extracellulare, rendendo questo anticorpo adatto a rilevare il CD95 di superficie in condizioni native e denaturanti.
• Per l'ELISA, considerare di rivestire con la fusione ricombinante CD95-Fc o utilizzare lisati cellulari; titolare l'anticorpo da 0,1-1 µg/mL come punto di partenza.
• Nella citometria a flusso, utilizzare 0,5-2 µg per 10^6 cellule; includere controlli isotipo appropriati e passaggi di blocco per minimizzare il legame aspecifico.
• Validare la specificità dell'anticorpo utilizzando modelli di topo knockout per CD95 o linee cellulari per confermare il riconoscimento del bersaglio.
• Notare che i livelli di espressione endogena del CD95 variano tra tessuti e stati di attivazione; sono raccomandati esperimenti pilota.

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