Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD99 per WB, IF/ICC, IHC-P, FC, ELISA - P14209

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD99

• CD99, noto anche come MIC2, HBA71, MIC2X, MIC2Y, MSK5X, è una glicoproteina della superficie cellulare codificata dal gene CD99 (noto anche come MIC2, MIC2X, MIC2Y). È stato originariamente identificato come l'antigene E2 sulle cellule T.
• La proteina è coinvolta nei processi di adesione delle cellule T e nella formazione spontanea di rosette con gli eritrociti, svolgendo un ruolo in una fase tardiva della diapedesi leucocitaria e aiutando i leucociti a superare la membrana basale endoteliale, indipendentemente da PECAM1.
• CD99 è soggetto a splicing alternativo, che produce molteplici isoforme potenzialmente dotate di funzioni distinte.
• Localizzazione subcellulare: CD99 è una proteina transmembrana presente prevalentemente sulla membrana plasmatica.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione e fosforilazione, che possono regolarne le funzioni adesive.
• La proteina core ha un peso molecolare previsto di circa 18,8 kDa, ma a causa della glicosilazione migra a 16-19 kDa nella SDS-PAGE.
• CD99 è espresso in un'ampia gamma di cellule ematopoietiche ed è utilizzato come marcatore diagnostico per il sarcoma di Ewing e i tumori neuroectodermici primitivi.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno corrisponde al dominio extracellulare N-terminale (amminoacidi 24-123), è probabile che l'anticorpo riconosca la forma nativa e non permeabilizzata di CD99, rendendolo adatto alla colorazione della superficie nella citometria a flusso e nell'immunofluorescenza.
• Per il Western blotting, è prevista una banda intorno a 16-19 kDa; l'utilizzo di condizioni riducenti può aiutare a risolvere le forme glicosilate. Validare la specificità mediante linee cellulari positive e negative o mediante silenziamento con siRNA.
• In IHC-P, il recupero antigenico (ad es. il recupero epitopico indotto dal calore in tampone citrato) può migliorare la rilevazione; si raccomanda una titolazione.
• Per IF/ICC, è possibile testare la colorazione sia su cellule fissate sia su cellule vive; se si utilizza la fissazione, una permeabilizzazione delicata può essere facoltativa poiché l'epitopo è extracellulare.
• Includere sempre controlli isotipici appropriati e confermare la reattività crociata esclusivamente con l'uomo, in conformità alle specifiche del prodotto.

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