PolimAb® anti-CDK4 da coniglio per WB, IP, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P11802

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della CDK4

• CDK4 (chinasi 4 dipendente dalle cicline), nota anche come chinasi 4 per la divisione cellulare o PSK-J3, è una serina/treonina-protein chinasi codificata dal gene CDK4 nell'uomo.
• In quanto subunità catalitica dei complessi ciclina D-CDK4, la CDK4 fosforila e inibisce i membri della famiglia delle proteine retinoblastoma (RB), in particolare RB1, durante la transizione G1/S del ciclo cellulare.
• La fosforilazione di RB1 da parte della CDK4 rilascia i fattori di trascrizione E2F, consentendo la trascrizione dei geni necessari per l'ingresso nella fase S e la progressione del ciclo cellulare.
• La CDK4 fosforila anche SMAD3 in modo dipendente dal ciclo cellulare, reprimendo la sua attività trascrizionale e integrando i segnali mitogenici e antimitogenici.
• La localizzazione subcellulare comprende citoplasma, nucleo e membrana nucleare; la traslocazione nel nucleo è facilitata dal complesso ternario ciclina D/CDK4/CDKN1B.
• Le parole chiave di UniProt evidenziano i suoi ruoli nel legame con l'ATP, nel ciclo cellulare e nella divisione cellulare, oltre alla sua regolazione per acetilazione e fosforilazione; le varianti patologiche sono associate al cancro.
• Il peso molecolare previsto è di circa 34 kDa (UniProt: 33,7 kDa) e lo splicing alternativo può generare isoforme aggiuntive.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 204-303 della CDK4 umana. Assicurarsi che l'epitopo bersaglio sia accessibile nel formato di saggio utilizzato; per il Western blotting possono essere necessarie condizioni denaturanti e riducenti.
• Per il Western blot (WB) è prevista una banda intorno ai 34 kDa nei lisati di linee cellulari umane, di topo o di ratto; confermare la specificità della banda utilizzando controlli positivi e negativi appropriati.
• Nell'immunoprecipitazione (IP), ottimizzare i rapporti anticorpo/lisato e includere un anticorpo di controllo appropriato per valutare l'efficienza di pull-down.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC) e l'immunohistochimica (IHC-P), convalidare i pattern di colorazione rispetto alle distribuzioni subcellulari note della CDK4 (nucleare e citoplasmatica) in cellule in proliferazione.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere l'abbinamento con un anticorpo di rilevazione adatto e curve standard utilizzando proteina CDK4 ricombinante.
• Eseguire sempre esperimenti di titolazione preliminari per determinare le concentrazioni di lavoro ottimali per i tuoi campioni e protocolli specifici.

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