Anticorpo policlonale rabbit anti-CDK5R1 per WB, IF/ICC, ELISA - Q15078

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della CDK5R1

• CDK5R1 (attivatore 1 della chinasi 5 ciclina-dipendente) codifica per la subunità regolatoria p35 e la sua forma troncata p25; entrambe agiscono come attivatori neuronali specifici della chinasi 5 ciclina-dipendente (CDK5).
• Il complesso p35/CDK5 è essenziale per il corretto sviluppo neuronale, inclusa l'estensione neuritica e la laminazione corticale, e media la segnalazione EFNA1-EPHA4 per regolare la morfogenesi della spina dendritica.
• CDK5R1 partecipa alla regolazione del ritmo circadiano interagendo con CLOCK; il complesso p35/CDK5 fosforila CLOCK presso i residui Thr-451 e Thr-461, modulando l'attività trascrizionale dell'eterodimero CLOCK-BMAL1 e influenzandone la stabilità e la distribuzione subcellulare.
• La proteina si localizza in diversi compartimenti subcellulari: membrana cellulare, proiezioni neuronali, citoplasma (regione perinucleare) e nucleo, riflettendo i suoi molteplici ruoli nella segnalazione e regolazione.
• L'espressione di CDK5R1 è altamente specifica per il cervello e i tessuti neuronali.
• Le modificazioni post-traduzionali chiave includono la miristoilazione (lipoproteina), la fosforilazione e l'ubiquitinazione (coniugazione Ubl); la struttura tridimensionale è già stata determinata.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per il Western blotting, la CDK5R1 (p35) ha un peso molecolare previsto di ~34 kDa; è inoltre possibile rilevare un prodotto di clivaggio p25 generato dalla calpaina (~25 kDa). Utilizzare marcatori di peso molecolare appropriati e considerare di convalidare l'identità della banda con controlli di knockdown o knockout.
• Per l'immunofluorescenza, ottimizzare la permeabilizzazione cellulare e la fissazione per la rilevazione nelle cellule neuronali, poiché la CDK5R1 si localizza su membrane, neuriti e regioni perinucleari. La co-colorazione con marcatori di compartimento può facilitare gli studi di localizzazione.
• Essendo un anticorpo policlonale, è necessario verificare la coerenza da lotto a lotto; titolare l'anticorpo per ogni nuovo lotto nel vostro specifico setup sperimentale.
• Per l'ELISA, valutare l'anticorpo come reagente di cattura o rilevamento con standard appropriati; la reattività crociata con gli omologhi della CDK5R1 di topo e ratto suggerisce l'utilizzo per saggi multi-specie, ma è necessario effettuare la convalida sulla matrice di campione di interesse.

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