Anticorpo monoclonale coniglio anti-CDK8 per WB e ELISA - P49336

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CDK8

• Il CDK8 è una chinasi dipendente dalla ciclina e un componente fondamentale del complesso Mediatore, un coattivatore essenziale per la trascrizione regolata di quasi tutti i geni dipendenti dalla RNA polimerasi II.
• Funge da ponte tra le proteine regolatorie specifiche del gene e la macchinaria trascrizionale basale, facilitando l'assemblaggio del complesso di pre-iniziazione con la RNA polimerasi II e i fattori di trascrizione generali.
• Il CDK8 fosforila il dominio C-terminale (CTD) della RNA polimerasi II, il che può inibire la formazione del complesso di iniziazione trascrizionale, agendo come un repressore trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:10993082
• Fosforila CCNH, portando alla down-regolazione del complesso TFIIH e alla repressione trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:10993082
• Attraverso l'interazione con MAML1, il CDK8 iperfosforila il dominio intracellulare di NOTCH, promuovendone la degradazione. Riferimenti correlati: PMID:15546612
• Il CDK8 modula selettivamente la risposta all'interferone fosforilando il dominio di transattivazione di STAT1.
• Localizzato prevalentemente nel nucleo, il CDK8 è una chinasi proteina serina/treonina con ruoli di attivatore e repressore, e le varianti genetiche sono collegate a disturbi dello spettro autistico e disabilità intellettiva.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 364–464 del CDK8 umano, una regione che può fornire specificità; si consiglia di verificare l'unicità dell'epitopo nel sistema di destinazione.
• Per il Western blot, ottimizzare la diluzione dell'anticorpo utilizzando lisati noti positivi per il CDK8 (es. cellule HeLa o HEK293) e confermare la banda attesa di ~53 kDa; dovrebbero essere inclusi i controlli di carico appropriati.
• Per l'ELISA, rivestire con proteina CDK8 ricombinante o lisati cellulari e convalidare la linearità del segnale attraverso un intervallo di concentrazioni; la reattività crociata con il CDK8 murino supporta saggi dual-specie.
• Dato che si tratta di un anticorpo monoclonale ricombinante di coniglio, ci si aspetta un'elevata riproducibilità da lotto a lotto; tuttavia, riconvalidare le prestazioni quando si applicano a nuove condizioni sperimentali.
• Si noti che il CDK8 è coinvolto in eventi di fosforilazione dinamici; considerare cocktail di inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare gli stati di segnalazione fosforilati.

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