Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CDKN2A/p16INK4a per WB, IF/ICC, ELISA - P42771

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CDKN2A/p16INK4a

• CDKN2A codifica l'inibitore 2A della chinasi dipendente da ciclina, noto anche come p16INK4a. Si tratta di un importante soppressore tumorale che regola negativamente la progressione del ciclo cellulare inibendo CDK4 e CDK6, impedendo la fosforilazione della proteina retinoblastoma e bloccando quindi la transizione G1/S.
• p16INK4a è un membro della famiglia INK4 degli inibitori delle CDK e contiene quattro motivi a ripetizione ankirina, essenziali per la sua interazione con le CDK.
• La localizzazione subcellulare coinvolge sia il citoplasma che il nucleo, a riprova del suo ruolo dinamico nella regolazione del ciclo cellulare.
• È ampiamente espresso nella maggior parte dei tessuti, ma è notoriamente assente nel cervello e nel muscolo scheletrico; è stata identificata un'isoforma specifica per il pancreas (isoforma 3).
• Modifiche post-traduzionali come l'acetilazione e la fosforilazione modulano la stabilità e la funzione di p16INK4a.
• Le alterazioni genetiche di CDKN2A sono associate a diversi tipi di cancro, tra cui il melanoma e la sindrome di Li-Fraumeni, a conferma della sua importanza come soppressore tumorale.
• La proteina ha un peso molecolare previsto di circa 16,5 kDa (UniProt) e viene rilevata a circa 17 kDa in condizioni sperimentali.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico che copre gli amminoacidi da 57 a 156 di CDKN2A/p16INK4a umano, includendo i domini chiave a ripetizione ankirina; per questo motivo, è probabile che riconosca la proteina nativa in più applicazioni.
• Per il Western blotting è prevista una banda a circa 17 kDa; per confermare la specificità, si consiglia di utilizzare lisati da linee cellulari con diversa espressione di p16INK4a o controlli knockout (il prodotto è validato KO).
• Nell'immunofluorescenza/ICC è prevista una colorazione sia nel compartimento nucleare che in quello citoplasmatico; è necessario convalidare protocolli di fissazione e permeabilizzazione adeguati per il proprio sistema di campioni specifico.
• Le prestazioni in ELISA devono essere valutate utilizzando antigeni peptidici o p16INK4a ricombinante; l'anticorpo può essere adatto per lo sviluppo di immunodosaggi sandwich se abbinato a reagenti di cattura e rilevazione appropriati.
• La reattività crociata è stata dimostrata per p16INK4a umano; se necessario, la reattività con altre specie o isoforme deve essere verificata sperimentalmente.

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