Anticorpo policlonale anti-cGAS per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q8N884

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di cGAS

• La ciclica GMP-AMP sintasi (cGAS, nota anche come MB21D1) è una nucleotidiltransferasi di 522 aminoacidi che catalizza la sintesi di 2'3'-cGAMP da ATP e GTP, svolgendo un ruolo centrale nell'immunità innata.
  Riferimenti correlati: PMID:21478870, PMID:23258413, PMID:23707061
• Dopo il legame con il DNA a doppio filamento (dsDNA) più lungo di 40 bp, la cGAS subisce una separazione di fase liquido-liquido, formando goccioline che migliorano la sua attività catalitica per produrre 2'3'-cGAMP, che agisce quindi come secondo messaggero per attivare STING1 e indurre interferoni di tipo I.
  Riferimenti correlati: PMID:28314590, PMID:28363908, PMID:29976794, PMID:30007416
• Come sensore di DNA, la cGAS rileva il DNA citosolico proveniente da agenti patogeni invasori — inclusi virus a DNA, retrovirus (es. HIV-2) e batteri come il Mycobacterium tuberculosis — innescando risposte immunitarie antimicrobiche.
  Riferimenti correlati: PMID:28363908, PMID:35613581, PMID:23929945, PMID:26048138, PMID:24269171, PMID:30270045, PMID:26046437
• Nelle cellule stressate o danneggiate, il DNA endogeno che fuoriesce dal nucleo o dai mitocondri (es. durante la senescenza, l'arresto mitotico o l'infezione da SARS-CoV-2) attiva la cGAS, collegandola all'infiammazione sterile, all'autoimmunità e alla senescenza cellulare.
  Riferimenti correlati: PMID:28738408, PMID:28759889, PMID:31299200
• La cGAS nucleare è strettamente regolata: l'interazione con i nucleosomi blocca la sua attività di legame al DNA per prevenire l'autoimmunità, mentre l'associazione con PARP1 inibisce la riparazione del DNA per ricombinazione omologa.
  Riferimenti correlati: PMID:31299200, PMID:32911482, PMID:32912999, PMID:30356214, PMID:31544964
• La cGAS umana mostra proprietà di riconoscimento del DNA specifiche per la specie, producendo livelli inferiori di 2'3'-cGAMP rispetto ad altri mammiferi, il che potrebbe conferire una risposta immunitaria più finemente regolata.
  Riferimento correlato: PMID:30007416
• La cGAS è principalmente citosolica ma si localizza anche nel nucleo, nella cromatina e nella membrana plasmatica. È espressa nelle cellule monocitiche (es. linea THP-1) ed è soggetta a molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e palmitoilazione.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli aminoacidi 350–522 della cGAS umana (NP_612450.2), coprendo il dominio catalitico C-terminale. Per il Western blotting, aspettarsi una banda a circa 59 kDa. Convalidare la specificità in linee cellulari che esprimono cGAS come THP-1.
• Questo anticorpo è adatto per rilevare la cGAS in campioni umani, di topo e di ratto tramite WB, IHC-P, IF/ICC ed ELISA. A causa della conservazione della sequenza, la reattività crociata dovrebbe essere verificata nella specie di interesse.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), si raccomanda l'ottimizzazione del recupero dell'antigene e della diluizione dell'anticorpo primario. Per IF/ICC, le condizioni di permeabilizzazione possono influenzare i pattern di colorazione nucleare rispetto a quelli citosolici.
• L'attività catalitica della cGAS dipende dal legame al DNA e dalla separazione di fase; pertanto, l'anticorpo può essere utilizzato per studiare gli stati di attivazione della cGAS in combinazione con saggi biochimici.

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