Anticorpo policlonale di coniglio anti-CHAMP1 per WB, IF/ICC, ELISA - Q96JM3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CHAMP1

• CHAMP1 (proteina fosforilata 1 che mantiene l'allineamento dei cromosomi), nota anche come proteina 828 con dita di zinco, è una proteina nucleare con un peso molecolare apparente di circa 89 kDa che svolge un ruolo fondamentale nella segregazione dei cromosomi mitotici.
• È necessaria per il corretto allineamento dei cromosomi sulla piastra metafasica e garantisce una segregazione accurata mantenendo l'attacco dei microtubuli del fuso ai cinetocori durante la biorientazione dei cromatidi fratelli.
• CHAMP1 può reclutare le proteine associate al cinetocore CENPE (proteina centromerica E) e CENPF nel cinetocore, facilitando le interazioni microtubulo-cinetocore.
• La proteina si localizza nel nucleo e si concentra nella regione centromerica/cinetocorica dei cromosomi durante la mitosi; è inoltre associata al fuso mitotico e al citoscheletro citoplasmatico.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, che probabilmente regolano le sue funzioni mitotiche.
• CHAMP1 contiene un dominio a dita di zinco, suggerendo capacità di legame al DNA o alle proteine che possono contribuire ai suoi ruoli di targeting della cromatina o del cinetocore.
• Le mutazioni in CHAMP1 sono associate a disabilità intellettiva (MRD40/NEDHILD), sottolineandone l'importanza nello sviluppo neurologico e nella divisione cellulare.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno comprende le regioni 563–812, è probabile che l'anticorpo riconosca sia CHAMP1 a lunghezza intera sia eventuali isoforme contenenti questa porzione C-terminale; validare la specificità in sistemi knockout o knockdown.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di 89 kDa; si consiglia di utilizzare un gel ad alta percentuale (ad es. 8–10%) con un tempo di trasferimento adeguato per le proteine ad alto peso molecolare.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, i metodi di fissazione e permeabilizzazione possono influenzare la colorazione dei cinetocori e dei cromosomi; testare la fissazione con metanolo o formaldeide con permeabilizzazione mediante Triton X-100.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con CHAMP1 murino, rendendolo adatto agli studi su linee cellulari o tessuti murini; tuttavia, è necessario verificare l'allineamento della sequenza nella regione dell'immunogeno.
• Eseguire esperimenti di titolazione ELISA per determinare la concentrazione ottimale dell'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo per configurazioni ELISA sandwich o dirette.

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