Anticorpo policlonale anti-Chk1 per WB, ELISA - O14757

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Chk1

• Chk1 (Chinasi del checkpoint 1) è una chinasi proteica serina/treonina e un membro della superfamiglia delle chinasi proteiche, con un dominio chinasi conservato e un sito di legame dell'ATP.
• È richiesto per l'arresto del ciclo cellulare mediato dal checkpoint e l'attivazione della riparazione del DNA in risposta al danno al DNA o al DNA non replicato, riconoscendo la sequenza consenso del substrato [R-X-X-S/T]. Riferimenti correlati: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Chk1 fosforila le fosfatasi CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C), creando siti di legame per 14-3-3 e promuovendo la proteolisi di CDC25A, inibendo così i complessi CDK-ciclina e bloccando la progressione del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• La fosforilazione di TP53 in più siti C-terminali da parte di Chk1 ne promuove l'acetilazione e l'attivazione, portando all'arresto del ciclo cellulare e alla soppressione della proliferazione. Riferimenti correlati: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Chk1 svolge ruoli diretti nella riparazione del DNA fosforilando RAD51 in Thr-309 (migliorando la ricombinazione omologa), FANCE (facilitando la riparazione dei cross-link del DNA) e regolando il mantenimento della forcella di replicazione attraverso PCNA. Riferimenti correlati: PMID:15665856 PMID:17296736 PMID:18451105
• Chk1 modula la cromatina attraverso la fosforilazione di TLK1 in Ser-743, impedendo la fosforilazione di ASF1A e potenzialmente migliorando l'assemblaggio cromatinico, e fosforilando l'istone H3.1 in Thr11 per regolare la trascrizione genica. Riferimenti correlati: PMID:12660173 PMID:12955071
• Una isoforma di CHEK1 generata per splicing alternativo agisce come un repressore endogeno di Chk1 a lunghezza intera, promuovendo la transizione dalla fase S alla fase G2/M attraverso interazione diretta e antagonismo.
• Chk1 si localizza nel nucleo, nei cromosomi, nel citoplasma e nei centrioli. È espresso ubiquitariamente con i livelli più alti nel timo, nei testicoli, nell'intestino tenue e nel colon.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting, utilizzare condizioni riducenti e preparare lisati da cellule o tessuti noti per esprimere Chk1, come il timo o i testicoli. Il peso molecolare previsto è di ~54 kDa; tuttavia, le modifiche post-traduzionali possono causare spostamenti apparenti.
• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 148-307 di Chk1 umano, che si trova all'interno del dominio chinasi. Sebbene questa regione sia altamente conservata nell'isoforma canonica, si consiglia la convalida con controlli appropriati per valutare la reattività con potenziali isoforme alternative.
• Questo anticorpo policlonale di coniglio è validato per ELISA e WB. Per le applicazioni ELISA, considerare l'utilizzo della proteina Chk1 ricombinante o di un frammento come standard, e ottimizzare la diluzione dell'anticorpo e le condizioni di blocco per il formato specifico del saggio.
• Essendo un anticorpo policlonale, è possibile una variabilità lotto-per-lotto. Consigliamo di convalidare le prestazioni nel sistema sperimentale e di includere appropriati controlli positivi e negativi.

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