Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Chk1 per WB, IHC-P, ELISA - O14757

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Chk1

• Codificata dal gene CHEK1, la serina/treonina proteina chinasi Chk1 subisce splicing alternativo per produrre più isoforme, inclusa un isoforma repressore endogeno che antagonizza la Chk1 full-length per promuovere la transizione dalla fase S alla fase G2/M.
• Agisce come chinasi di checkpoint critica, necessaria per l'arresto del ciclo cellulare e l'attivazione della riparazione del DNA in risposta a danno al DNA o DNA non replicato, tramite il riconoscimento della sequenza consenso del substrato [R-X-X-S/T]. Riferimenti correlati: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, creando siti di legame per 14-3-3 o predisponendoli alla poliubiquitinazione e degradazione mediata da NEK11, inibendo così i complessi CDK-ciclina e bloccando la progressione del ciclo cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• Migliora la riparazione del DNA per ricombinazione omologa tramite fosforilazione di RAD51 alla Treonina-309, promuovendo il rilascio di RAD51 da BRCA2 e aumentando la sua associazione alla cromatina. Riferimenti correlati: PMID:15665856
• Fosforila l'estremità C-terminale di TP53, migliorandone l'acetilazione e l'attività trascrizionale per promuovere l'arresto del ciclo cellulare e sopprimere la proliferazione. Riferimenti correlati: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Modula la struttura della cromatina e l'espressione genica fosforilando l'istone H3.1 alla Treonina-11 (H3T11ph), portando al silenziamento epigenetico di un sottoinsieme di geni (per similarità).
• Si localizza nel nucleo, sui cromosomi, nel citoplasma e nel centrosoma, riflettendo i suoi molteplici ruoli nel controllo del ciclo cellulare e nel mantenimento del genoma.
• È espressa ubiquitariamente con i livelli più alti nel timo, testicolo, intestino tenue e colon, tessuti con alti tassi di proliferazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 1-100 all'estremità N-terminale; si consiglia di confermare la specificità dell'epitopo tramite competizione peptidica o mutanti di delezione nel proprio sistema di analisi.
• Per il Western blotting, il peso molecolare atteso è ~54 kDa; utilizzare un gel SDS-PAGE al 10% e ottimizzare le condizioni di trasferimento per la rilevazione di proteine ad alto peso molecolare.
• Nell'immunoistochimica su paraffina, potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene con tampone citrato (pH 6,0); includere timo o testicolo come tessuti di controllo positivo e IgG di coniglio isotipo come controllo negativo.
• Per l'ELISA, possono essere valutati formati diretti o a sandwich; si consiglia di utilizzare saggi competitivi con il peptide immunogeno per convalidare la specificità di legame.
• Questo anticorpo è validato per la reattività con l'uomo; la reattività incrociata con altre specie non è stata determinata, pertanto si raccomanda una convalida specifica per specie se viene esteso ad altri modelli.

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