Anticorpo policlonale anti-CHRNA1 per WB, IF, IHC, ELISA - P02708

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CHRNA1

• CHRNA1 codifica la subunità alfa del recettore nicotinico dell'acetilcolina (AChR), un canale ionico attivato da ligando che media la trasmissione sinaptica rapida alla giunzione neuromuscolare. Al legame dell'acetilcolina, il recettore subisce un cambiamento conformazionale che porta all'apertura del canale e all'afflusso di cationi.
• La proteina è nota anche con diversi alias: ACHRA, ACHRD, CHRNA, CMS1A, CMS1B, CMS2A, FCCMS, SCCMS. Esistono due isoforme dovute allo splicing alternativo: l'isoforma 1 è specifica del muscolo scheletrico, mentre l'isoforma 2 è ampiamente espressa nel cervello, cuore, rene, fegato, polmone e timo.
• CHRNA1 è un membro della famiglia dei canali ionici attivati da ligando, caratterizzata da un grande dominio extracellulare N-terminale, quattro eliche transmembrana e un anello citoplasmatico. Contiene legami disolfuro e siti di glicosilazione critici per l'assemblaggio e la funzione del recettore.
• A livello subcellulare, l'AChR si trova sulla membrana cellulare postsinaptica, dove si raggruppa alla giunzione neuromuscolare. Una corretta localizzazione richiede l'interazione con la rapsina e altre proteine di impalcatura.
• Le mutazioni in CHRNA1 sono associate a sindromi miasteniche congenite (CMS), tra cui CMS1A, CMS1B e CMS2A, nonché alla sindrome miastenica congenita a canale lento (SCCMS). Queste mutazioni alterano la cinetica del canale, l'espressione del recettore o l'affinità per l'agonista.
• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo corrisponde agli aminoacidi 105-220 della proteina CHRNA1 umana, che si trova all'interno del dominio extracellulare. Questa regione è probabilmente in grado di riconoscere entrambe le isoforme ed è conservata tra umano e topo, consentendo la reattività crociata.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-legata e la formazione di legami disolfuro, importanti per il ripiegamento e la stabilità. La proteina ha un peso molecolare calcolato di ~52kDa, coerente con la banda osservata nel western blot.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo policlonale è prodotto nel coniglio contro un frammento ricombinante (aa 105-220). Per il western blot, è prevista una banda intorno a 52kDa nei lisati di muscolo scheletrico umano e murino; considerare l'uso di condizioni riducenti e un tampone di blocco adeguato per minimizzare il legame non specifico.
• Per l'immunoprecipitazione, il riconoscimento di un epitopo extracellulare da parte dell'anticorpo può essere vantaggioso; tuttavia, si consiglia la convalida nel sistema cellulare/tessuto pertinente.
• Nell'immunofluorescenza e nell'immunoistochimica, i metodi ottimali di fissaggio e permeabilizzazione dovrebbero essere determinati empiricamente, poiché l'epitopo si trova nel dominio extracellulare che potrebbe essere sensibile a un'eccessiva fissazione. Utilizzare controlli appropriati come linee cellulari knockout o peptidi di blocco.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come cattura o rilevamento; titolare per determinare la concentrazione di lavoro ottimale.

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