Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-Cleaved Caspase-8 (Asp384) per WB, ELISA - Q14790

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Caspasi-8

• La Caspasi-8 è una proteasi tiolica che funge da interruttore molecolare per l'apoptosi, la necroptosi e la piroptosi, ed è essenziale per prevenire danni tissutali durante lo sviluppo e l'età adulta. Riferimenti correlati: PMID:23516580 PMID:35338844 PMID:35446120
• Come caspasi iniziatrice, media l'apoptosi estrinseca formando il complesse di segnalazione indotto dalla morte (DISC) dopo l'attivazione di FAS/CD95 o TNFRSF1A, portando alla scissione e all'attivazione delle caspasi effetrici CASP3, CASP6, CASP7 e altre. Riferimenti correlati: PMID:8681376 PMID:8681377 PMID:9184224 PMID:8962078 PMID:9006941 PMID:16916640
• Esistono diverse isoforme: l'isoforma 1 (a lunghezza intera), l'isoforma 5 e l'isoforma 7 sono ampiamente espresse; le isoforme prive del sito catalitico agiscono come inibitori della cascata delle caspasi. Riferimenti correlati: PMID:12010809
• La proteina si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nelle proiezioni cellulari come i lamellipodi, e subisce fosforilazione a Tyr-380 per promuovere la migrazione cellulare indipendentemente dall'attività proteasica. Riferimenti correlati: PMID:18216014 PMID:27109099
• La Caspasi-8 regola negativamente la necroptosi clivando RIPK1 ad Asp-324, limitando l'attività chinasica e le risposte infiammatorie. Riferimenti correlati: PMID:31827280 PMID:31827281
• Inoltre, avvia la piroptosi clivando la gasdermina-C e la gasdermina-D, e partecipa all'immunità innata inattivando N4BP1 a valle di TLR3/4. Riferimenti correlati: PMID:32929201 PMID:34012073
• L'espressione più elevata si osserva nei leucociti del sangue periferico, nella milza, nel timo e nel fegato, con livelli inferiori nel cervello, nei testicoli e nel muscolo scheletrico.
• Le parole chiave includono: splicing alternativo, zimogeno, proteasi tiolica, variante della malattia e interazione ospite-virus.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 371–470 della Caspasi-8 umana (NP_203519.1), che copre la regione della subunità grande a seguito dell'autoclivaggio ad Asp384; pertanto, l'anticorpo è specifico per la forma scissa e attivata.
• Per il Western blot, il pro-enzima migra a circa 55 kDa, mentre la subunità grande scissa appare tipicamente intorno a 43–45 kDa. Si consiglia l'inclusione di controlli positivi e negativi appropriati (ad es. cellule trattate con induttori di apoptosi) per verificare l'identità della banda.
• L'ottimizzazione dell'ELISA potrebbe richiedere la titolazione della concentrazione dell'anticorpo e un'attenta selezione degli agenti di blocco per ridurre il rumore di fondo; considerare l'uso della proteina ricombinante Caspasi-8 o di un peptide come standard.
• La reattività crociata con altre specie non è stata determinata; convalidare nel sistema di campione pertinente se sono previste applicazioni non umane.

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