Anticorpo monoclonale anti-PARP clivato (Asp214) per WB, IF/ICC, ELISA - P09874

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della PARP1

• PARP1 è una poli-ADP-ribosiltransferasi nucleare che media la poli-ADP-ribosilazione delle proteine substrato, svolgendo un ruolo centrale nella riparazione del DNA, nel rimodellamento della cromatina e nella stabilità del genoma (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500). Riferimenti correlati: PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• Catalizza l'ADP-ribosilazione legata a serina, glutammato e tirosina, con specificità per i residui determinata dai cofattori HPF1 e NMNAT1 (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836). Riferimenti correlati: PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• Nella riparazione del DNA, PARP1 rileva le rotture del filamento, recluta i fattori di riparazione e promuove il rilassamento della cromatina per facilitare l'escissione delle basi e la riparazione delle rotture a doppio filamento (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625). Riferimenti correlati: PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• Durante l'apoptosi, PARP1 viene clivata dalle caspasi-3 e -7 in Asp214, generando un grande frammento catalitico (∼89 kDa) che si trasloca nel citoplasma e funge da vettore di poli-ADP-ribosio, innescando l'apoptosi mediata da AIFM1 (PubMed:33168626). Riferimenti correlati: PMID:33168626
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente nucleare e nucleolare in condizioni normali; dopo il clivaggio, il frammento catalitico si riloca nel citoplasma.
• PARP1 subisce estese modificazioni post-traduzionali, tra cui acetilazione, ADP-ribosilazione (automodificazione), fosforilazione e ubiquitinazione, che regolano la sua attività e le sue interazioni.
• Oltre alla riparazione del DNA, PARP1 svolge funzioni nella regolazione della trascrizione, nella progressione della forcella di replicazione, nell'adipogenesi e nell'immunità innata modulando le attività proteiche e la struttura della cromatina (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603). Riferimenti correlati: PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo bersaglia il neo-epitopo in Asp214; pertanto, rileva specificamente il frammento di PARP clivato piuttosto che la PARP a lunghezza completa. Per il western blot, trattare le cellule con induttori di apoptosi (es. staurosporina o etoposide) per arricchire il frammento di ∼89 kDa.
• Per immunofluorescenza/ICC, considerare la fissazione dopo l'induzione dell'apoptosi per osservare la localizzazione citosolica del frammento clivato. Validare la specificità della colorazione nel vostro sistema sperimentale con controlli appropriati.
• L'idoneità per l'ELISA è stata riportata; nella progettazione dei saggi, considerare l'uso del frammento di PARP clivato ricombinante o del peptide come standard e ottimizzare le condizioni di rivestimento e rilevazione.

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