Anticorpo Policlonale Anti-CLOCK di Coniglio per WB, ELISA - O15516

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CLOCK

• CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput), noto anche come bHLHe8, è un componente centrale dell'orologio circadiano molecolare che guida ritmi di circa 24 ore nell'espressione genica, nel metabolismo e nel comportamento (UniProt O15516).
• Come ramo positivo del ciclo di feedback trascrizione/traduzione, CLOCK forma un eterodimero con BMAL1 (o BMAL2) per legare gli elementi E-box (5'-CACGTG-3') nei promotori dei geni dell'orologio centrale (PER1/2/3, CRY1/2) e dei geni controllati dall'orologio, attivando così la trascrizione.
• L'eterodimero CLOCK-BMAL1 riconosce preferenzialmente il motivo 5'-CACGTGA-3', dove CLOCK lega il semi-sito 5'-CAC-3' e BMAL1 lega il semi-sito 5'-GTGA-3'; vengono riconosciuti anche motivi non canonici 5'-AACGTGA-3' e 5'-CATGTGA-3'. Riferimenti correlati: PMID:23229515
• CLOCK possiede un'attività acetiltransferasica intrinseca per gli istoni, consentendo il rimodellamento cromatinico circadiano acetilando istoni (es. H3, H4) e proteine non istoniche, incluso lo stesso BMAL1; questa attività è cruciale quanto la trascrizione per la generazione del ritmo.
• Acetila l'argininosuccinato sintasi 1 (ASS1) in modo circadiano, portando all'inibizione dell'attività enzimatica e al controllo ritmico della biosintesi dell'arginina e dell'ureogenesi, collegando così l'orologio al metabolismo. Riferimenti correlati: PMID:28985504
• CLOCK reprime l'attività trascrizionale del recettore dei glucocorticoidi NR3C1/GR acetilando multipli residui di lisina nella regione cerniera del recettore, riducendone l'associazione con gli elementi di risposta ai glucocorticoidi. Riferimenti correlati: PMID:21980503
• A livello subcellulare, CLOCK è principalmente nucleare ma viene rilevato anche nel citoplasma e nel citosol. È ampiamente espresso, con livelli più alti nel testicolo e nel muscolo scheletrico, ed è altamente arricchito nel nucleo soprachiasmatico (SCN) del cervello, l'orologio centrale.
• Modificazioni post-traduzionali come fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione modulano finemente la stabilità e l'attività di CLOCK, contribuendo al controllo oscillatorio preciso dei ritmi circadiani.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 450-600 di CLOCK umano, una regione che può garantire il riconoscimento del dominio acetiltransferasico e aiutare a rilevare sia la forma a lunghezza intera che potenziali isoforme; considerare di verificare la reattività nella specie e nel tessuto rilevanti.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto di CLOCK è 95 kDa; tuttavia, modificazioni post-traduzionali (es. fosforilazione, acetilazione) potrebbero spostare la banda osservata. Utilizzare tamponi di blocco e di rilevamento appropriati ottimizzati per anticorpi policlonali di coniglio.
• Per l'ELISA, assicurarsi che la proteina ricombinante o il peptide utilizzato per il rivestimento corrisponda alla regione dell'immunogeno per massimizzare la cattura dell'anticorpo. Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale nel proprio sistema di saggio.
• È stata riportata reattività crociata per umano, topo e ratto; validare nell'organismo modello scelto utilizzando controlli positivi e negativi. L'espressione di CLOCK è circadiana, quindi considerare l'orario di raccolta dei campioni quando si esaminano i livelli endogeni.

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