Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Complemento C4A per WB, IF-P, ELISA - P0C0L4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del Complemento C4-A

• Il Complemento C4-A è un componente non enzimatico delle vie del complemento classica, delle lectine e GZMK, e funge da precursore che viene attivato proteoliticamente per partecipare alla difesa immunitaria innata.
• Dopo la scissione da parte di proteasi del complemento come C1S, MASP2 o GZMK, genera C4b, che si lega in modo covalente alle superfici dei patogeni, agendo come opsonina per marcare gli antigeni per la rimozione. Riferimenti correlati: PMID:8538770 PMID:27738201
• C4b recluta quindi il complemento C2b per formare le C3 e C5 convertasi, che scindono e attivano C3 e C5, propagando la cascata del complemento. Riferimenti correlati: PMID:12878586 PMID:18204047 PMID:2387864
• Il frammento C4a, rilasciato durante l'attivazione, è strutturalmente simile alle anafilatossine; tuttavia, il suo ruolo rimane poco chiaro e i precedenti rapporti sulla sua funzione di mediatore infiammatorio potrebbero essere dovuti a contaminazione. Riferimenti correlati: PMID:6167582 PMID:25659340
• Il Complemento C4-A è principalmente secreta dagli epatociti, con la più alta espressione nel fegato; la sintesi extraepatica in tessuti come ghiandola surrenale, tiroide e rene contribuisce alla protezione immunitaria locale. Riferimenti correlati: PMID:11367523
• Subcellularmente, viene secreto nello spazio extracellulare e si localizza anche a livello delle sinapsi, assoni neuronali, dendriti e superfici cellulari.
• La proteina subisce diverse modifiche post-traduzionali tra cui formazione di legami disolfuro, glicosilazione, fosforilazione e solfatazione, e contiene un legame tioestere reattivo essenziale per l'attacco covalente alle superfici bersaglio.
• È associato a varianti patologiche nel lupus eritematoso sistemico e porta determinanti antigenici del gruppo sanguigno; esistono più isoforme dovute allo splicing alternativo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde a un frammento C-terminale (aa 940-1237), che può conferire specificità per l'isoforma; tuttavia, la reattività crociata con il C4B altamente omologo deve essere verificata sperimentalmente.
• Per il Western blotting, utilizzare gel di poliacrilammide a bassa percentuale e tempi di trasferimento prolungati per risolvere e trasferire in modo efficiente il bersaglio ad alto peso molecolare (~193 kDa).
• Nell'immunofluorescenza (IF-P), poiché C4A è secreta e può depositarsi sulle superfici cellulari, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per rilevare sia la proteina intracellulare che quella legata alla superficie.
• Per l'ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento; accoppiarlo con un altro clone che bersaglia un epitopo non sovrapponibile per lo sviluppo di un ELISA sandwich.
• Poiché l'attivazione del complemento può consumare C4, tenere in considerazione le condizioni di manipolazione e conservazione del campione per preservare i livelli di proteina nativa.

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