Anticorpo Monoclonale Anti-COX5B per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P10606

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del COX5B

• COX5B, noto anche come subunità 5B del citocromo c ossidasi o COXVB, è un componente codificato nel nucleo del complesso IV (citocromo c ossidasi) nella catena di trasporto degli elettroni mitocondriale.
• Catalizza la riduzione terminale dell'ossigeno molecolare ad acqua, accoppiando il trasferimento di elettroni al pompaggio di protoni attraverso la membrana mitocondriale interna per guidare la sintesi di ATP.
• La proteina si localizza specificamente sulla membrana interna mitocondriale, dove si associa con altre subunità dell'oloenzima citocromo c ossidasi.
• Insieme ai complessi II e III, COX5B contribuisce alla catena respiratoria che trasferisce elettroni da NADH e succinato all'ossigeno, stabilendo un gradiente elettrochimico.
• Il sito attivo del citocromo c ossidasi include eme A3 e rame B (CuB), con COX5B che svolge un ruolo strutturale nel mantenere l'integrità e la funzione del centro binucleare.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'acetilazione, e la proteina lega uno ione zinco (legame metallico), come identificato dalla proteomica e dal sequenziamento diretto delle proteine.
• La proteina matura (dopo la clivaggio del peptide di transito mitocondriale) ha un peso molecolare di circa 14 kDa, corrispondente alla maggior parte della subunità matura.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre gli aminoacidi 29–129 del COX5B umano, una regione che corrisponde alla proteina matura dopo la rimozione della sequenza di targeting mitocondriale; questo design migliora il riconoscimento della forma endogena processata.
• Per il Western blotting (WB), considerare l'uso di condizioni riducenti ed estratti proteici arricchiti di mitocondri per massimizzare il rilevamento della banda di ~14 kDa.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC) e nell'immunoistochimica (IHC-P), la colorazione del COX5B mostra tipicamente un pattern mitocondriale punteggiato; validare con marcatori di organelli per confermare la localizzazione.
• L'anticorpo cross-reagisce con il COX5B di topo e ratto; verificare la reattività nei lisati cellulari o tissutali delle specie pertinenti, poiché l'omologia di sequenza nella regione immunogenica può variare.
• Per le applicazioni ELISA, ottimizzare le condizioni di rivestimento e le diluizioni dell'anticorpo utilizzando COX5B ricombinante o frazioni mitocondriali da campioni umani, di topo o di ratto.
• Essendo un anticorpo monoclonale, è adatto per prestazioni coerenti da lotto a lotto; tuttavia, ogni nuova applicazione deve essere titolata e validata nel sistema di campione previsto.

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