Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-CRY2 per WB, IF/ICC, ELISA - Q49AN0

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CRY2

• La Criptocromo-2 (CRY2) è un componente centrale dell'orologio circadiano, che agisce come repressore trascrizionale nel braccio negativo del ciclo di retroazione trascrizione/traduzione (TTFL). Interagisce con l'eterodimero CLOCK/BMAL1 per inibirne l'attività trascrizionale.
• Insieme a CRY1, CRY2 regola il periodo circadiano; sebbene entrambe abbiano funzioni ridondanti, CRY2 ha un'attività repressiva meno potente nel cervelletto e nel fegato e svolge un ruolo critico nel modulare il periodo circadiano del SCN opponendosi alle azioni di CRY1.
• CRY2 è coinvolto nella modulazione del metabolismo del glucosio e dei lipidi, reprimendo i geni target di PPARD nel muscolo scheletrico e regolando geni come LEP e ACSL4.
• Reprime l'attività trascrizionale indotta dal recettore dei glucocorticoidi (NR3C1/GR) legandosi agli elementi di risposta ai glucocorticoidi e reprime anche la trascrizione indotta da CLOCK-BMAL1 di BHLHE40/DEC1 e NAMPT.
• A livello subcellulare, CRY2 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, consentendole di spostarsi tra i compartimenti come parte della regolazione dell'orologio.
• Le modificazioni post-traduzionali, inclusa fosforilazione e ubiquitinazione, sono fondamentali per determinare il periodo circadiano (tau) e la stabilità di CRY2.
• CRY2 è ampiamente espresso nei tessuti umani, con i livelli più alti nel cuore e nel muscolo scheletrico, ed è presente anche nel cervello, fegato, rene e molti altri.
• La proteina lega FAD e può avere proprietà fotoricettive, sebbene nei mammiferi il suo ruolo primario sia la regolazione trascrizionale all'interno del meccanismo dell'orologio.

Linee Guida Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (amminoacidi 455-614), che può essere ben esposta in condizioni denaturanti; considerare l'uso di SDS-PAGE riducente per il Western blot per rilevare la banda a 67kDa.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, ottimizzare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione, poiché CRY2 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo; metanolo o paraformaldeide con Triton X-100 possono dare risultati diversi.
• L'ELISA può essere utilizzato per la quantificazione; considerare un approccio ELISA sandwich con una coppia di anticorpi abbinati e validare linearità e sensibilità utilizzando la proteina CRY2 ricombinante.
• La reattività crociata è confermata per campioni umani e di ratto; quando si utilizzano altre specie, eseguire un allineamento di sequenze e validare nel sistema campione rilevante.
• Includere controlli positivi appropriati (ad es., lisati cellulari HEK293, HeLa) e controlli negativi (campioni con knockdown siRNA o knockout) per confermare la specificità dell'anticorpo.

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