Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CTCF per WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP, ChIP-seq, CUT&Tag - P49711

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CTCF

• CTCF, noto anche come fattore di legame CCCTC o proteina a 11 dita di zinco, è un fattore di legame alla cromatina che si lega a siti DNA sequenza-specifici e regola la struttura tridimensionale della cromatina formando anse e ancorando il DNA alle strutture nucleari. Riferimenti correlati: PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629
• Definisce i confini tra DNA attivo ed eterocromatico legandosi agli isolatori della cromatina, prevenendo le interazioni tra promotori e enhancer/silenziatori vicini, mediando così il silenziamento genico a lungo raggio. Riferimenti correlati: PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• CTCF partecipa all'espressione genica allele-specifica nel locus imprinted IGF2/H19, mediando la conformazione della cromatina di ordine superiore e limitando l'accesso dell'enancer a IGF2 sull'allele materno. Riferimenti correlati: PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• Svolge un ruolo fondamentale nell'inattivazione del cromosoma X, stabilendo un interruttore epigenetico regolabile e prevenendo la propagazione della metilazione stabile nei geni che sfuggono all'inattivazione. Riferimenti correlati: PMID:11743158
• CTCF è localizzato principalmente nel nucleo e si associa ai centromeri e ai bracci cromosomici durante la metafase; è richiesto per la localizzazione della coesina e la coesione dei cromatidi fratelli. Riferimenti correlati: PMID:18550811, PMID:26321640
• Agisce come repressore trascrizionale di MYC e BAG1 e come attivatore trascrizionale di APP, dimostrando le sue doppie funzioni regolatorie. Riferimenti correlati: PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• La proteina contiene molteplici siti di modificazione post-traduzionale, tra cui acetilazione, fosforilazione e sumoilazione (legame isopeptidico), che regolano la sua attività di legame alla cromatina e trascrizionale.
• CTCF è espresso ubiquitariamente nei tessuti umani ma è notevolmente assente negli spermatociti primari, indicando ruoli regolatori specifici per tessuto.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno copre gli amminoacidi 628–727 nella regione C-terminale del CTCF umano, un dominio distinto dalla regione di legame al DNA a dita di zinco, che potenzialmente aumenta la specificità dell'anticorpo per il CTCF endogeno rispetto ad altre proteine a dita di zinco.
• Per il Western blotting è prevista una banda attesa a circa 83 kDa; la migrazione effettiva può differire a causa di modifiche post-traduzionali o delle condizioni del gel, quindi si consiglia di validare con un controllo positivo noto.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e il ChIP-seq, ottimizza le condizioni di reticolazione e shear della cromatina per il tuo tipo cellulare; includi regioni genomiche di controllo positivo (es. H19 ICR) e negativo per valutare l'arricchimento.
• Quando esegui l'immunofluorescenza, i protocolli di fissazione e permeabilizzazione devono essere testati empiricamente per garantire una colorazione nucleare robusta; si può osservare la localizzazione subcellulare nel nucleo e nei centromeri.
• L'anticorpo è adatto per CUT&Tag, rappresentando un'alternativa efficiente al ChIP-seq con un minor input cellulare; si consiglia di validare le condizioni di marcatura enzimatica e la concentrazione dell'anticorpo per risultati ottimali.

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