Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Cullin-4A per WB, IHC-P, ELISA - Q13619

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Cullin-4A

• CUL4A è la proteina impalcatura delle ligasi E3 ubiquitina cullin-RING, facilitando il trasferimento dell'ubiquitina posizionando il substrato e l'enzima E2 (PubMed:14578910, PubMed:14739464, PubMed:15448697). Riferimenti correlati: PMID:14578910 PMID:14739464 PMID:15448697

• L'attività ligasica E3 dipende dalla neddilazione di CUL4A; CUL4A deneddilata lega TIP120A/CAND1 per inibire il complesso (PubMed:14578910, PubMed:14739464, PubMed:15448697). Riferimenti correlati: PMID:14578910 PMID:14739464 PMID:15448697

• La specificità del substrato è determinata dai fattori associati DDB1-CUL4A (DCAFs): DCX(DET1-COP1) ubiquitina JUN (PubMed:14739464); DCX(DDB2) ha come bersaglio XPC (PubMed:15811626) e gli istoni H3-H4 per l'assemblaggio del nucleosoma (PubMed:16678110, PubMed:17041588, PubMed:24209620). Riferimenti correlati: PMID:14739464 PMID:15811626 PMID:16678110 PMID:17041588 PMID:24209620

• Il complesso DCX(DTL) poliubiquitina CDT1 e p53/TP53 durante il danno e la replicazione del DNA (PubMed:14578910, PubMed:15448697, PubMed:15548678) e media l'autoubiquitinazione di DTL (PubMed:23478445). Riferimenti correlati: PMID:14578910 PMID:15448697 PMID:15548678 PMID:23478445

• CUL4A, tramite DCX(ERCC8), è essenziale nella riparazione accoppiata alla trascrizione (TCR) (PubMed:12732143, PubMed:32355176, PubMed:38316879). Riferimenti correlati: PMID:12732143 PMID:32355176 PMID:38316879

• CUL4A partecipa al pathway DesCEND prendendo di mira proteine con degroni C-terminali tramite complessi DCX contenenti TRPC4AP o DCAF12 (PubMed:29779948). Riferimenti correlati: PMID:29779948

• Il complesso DCX(AMBRA1) media la transizione G1/S ubiquitinando la ciclina D (PubMed:33854232, PubMed:33854239) e regola i complessi CRL5 degradando Elongin-C (PubMed:30166453). Riferimenti correlati: PMID:33854232 PMID:33854239 PMID:30166453

• Insieme a CUL4B, CUL4A contribuisce alla biogenesi dei ribosomi (PubMed:26711351). Riferimenti correlati: PMID:26711351

• CUL4A è una fosfoproteina coinvolta nelle interazioni ospite-virus ed è un attore chiave nel sistema ubiquitina-proteasoma, con impatto sulla riparazione del DNA, sul ciclo cellulare e sui ritmi circadiani.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 660–759; pertanto, l'anticorpo probabilmente riconosce un epitopo lineare nella regione C-terminale di CUL4A umana. Questo design spesso supporta un rilevamento affidabile nelle condizioni denaturanti del Western blot (WB).
• Per il WB, dovrebbe essere osservata una banda attesa intorno a 88 kDa; considerare l'uso di una scala proteica con marcatori di peso molecolare appropriati e ottimizzare le condizioni di blocco e incubazione dell'anticorpo per il lisato specifico del campione.
• Per l'IHC-P, i metodi di recupero dell'antigene (ad esempio, recupero dell'epitopo indotto dal calore) possono essere utili; validare la specificità della colorazione nei campioni di tessuto umano rilevanti utilizzando controlli appropriati.
• Le applicazioni ELISA possono trarre vantaggio dall'ottimizzazione delle concentrazioni dell'antigene di rivestimento e dei sistemi di rilevamento per garantire linearità e sensibilità; la natura monoclonale di questo anticorpo aiuta a ridurre la variabilità lotto-lotto.
• Poiché l'anticorpo è prodotto in coniglio, utilizzare anticorpi secondari anti-IgG di coniglio per il rilevamento; la reattività crociata con altre specie non è stata validata oltre l'umano, quindi verificare la reattività se si utilizzano campioni non umani.

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