Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Cullina 4A per WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13619

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Cullina-4A

• CUL4A funge da proteina impalcatura centrale all'interno dei complessi ligasi E3 cullina-RING ubiquitina (CRLs), permettendo il trasferimento dell'ubiquitina alle proteine substrato posizionando sia il substrato che l'enzima di coniugazione dell'ubiquitina. L'attività ligasica dipende dalla neddilazione della cullina ed è inibita dall'associazione di CUL4A deneddilata con CAND1. Riferimenti correlati: PMID:14578910, PMID:14739464, PMID:15448697
• Il complesso DCX(DDB2) utilizza DDB2 come recettore del substrato per ubiquitinare XPC, istoni H3-H4 e altri bersagli, svolgendo ruoli critici nella riparazione per escissione di nucleotidi e nell'assemblaggio dei nucleosomi accoppiato alla replicazione. Riferimenti correlati: PMID:15811626, PMID:16678110, PMID:17041588, PMID:24209620
• Attraverso il complesso DCX(DTL), CUL4A media la poliubiquitinazione dipendente da PCNA di CDT1 e l'ubiquitinazione dipendente da MDM2 di p53/TP53 in risposta al danno al DNA e durante la replicazione del DNA, e dirige anche l'autoubiquitinazione di DTL. Inoltre, il complesso DDB1-CUL4A-DTL regola il ritmo circadiano ubiquitinando CRY1 per la sua degradazione. Riferimenti correlati: PMID:14578910, PMID:15448697, PMID:15548678, PMID:23478445, PMID:26431207
• Il complesso DCX(ERCC8) (complesso CSA) partecipa alla riparazione accoppiata alla trascrizione (TCR), rimuovendo lesioni del DNA dai geni attivamente trascritti. Riferimenti correlati: PMID:12732143, PMID:32355176, PMID:38316879
• Il complesso DCX(AMBRA1) funge da regolatore principale della transizione del ciclo cellulare G1/S, mirando alla ciclina D fosforilata (CCND1, CCND2, CCND3) per ubiquitinazione e degradazione. Regola anche i complessi CRL5 attraverso l'ubiquitinazione e la degradazione di Elongina-C (ELOC). Riferimenti correlati: PMID:33854232, PMID:33854239, PMID:30166453
• CUL4A è implicata nell'ubiquitinazione di numerosi altri substrati, tra cui JUN (tramite DET1-COP1), CDKN1B/p27 (con DDB1-SKP2) e HOXA9, evidenziando i suoi ampi ruoli regolatori. Riferimenti correlati: PMID:14739464, PMID:16537899, PMID:14609952
• Insieme a CUL4B, CUL4A contribuisce alla biogenesi dei ribosomi. Riferimenti correlati: PMID:26711351

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che copre gli amminoacidi 1–300 di CUL4A umana, indicando che l'anticorpo mira alla regione N-terminale; ciò può influenzare l'accessibilità dell'epitopo in alcuni saggi.
• Nel Western blotting (WB), attendersi una banda a circa 88 kDa; includere inibitori delle proteasi durante la lisi e considerare l'uso di campioni freschi per evitare la degradazione.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), validare la capacità dell'anticorpo di catturare i complessi nativi di CUL4A in condizioni non denaturanti.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare i protocolli di fissazione/permeabilizzazione, poiché CUL4A è prevalentemente nucleare; confermare la specificità della colorazione con controlli appropriati.
• Questo anticorpo reagisce in modo incrociato con CUL4A umana, di topo e di ratto; quando si utilizzano campioni di roditori, assicurarsi che il sistema di rilevamento sia compatibile e che la banda bersaglio sia distinguibile dalle immunoglobuline endogene nell'IP.
• Essendo un anticorpo policlonale, potrebbe verificarsi una variabilità da lotto a lotto; considerare di titolare l'anticorpo per ogni nuova applicazione e includere controlli positivi e negativi.

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