Anticorpo policlonale di coniglio Anti-CXCL12/SDF-1 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P48061

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di CXCL12

• CXCL12, noto anche come fattore 1 derivato dalle cellule stromali (SDF-1), è una chemochina CXC secreta che esiste in diverse isoforme (alfa, beta, gamma, delta, epsilon, theta) a causa dello splicing alternativo.
• CXCL12 agisce come chemiotattico per i linfociti T e i monociti, ma non per i neutrofili, legando e attivando il recettore CXCR4, determinando una rapida mobilizzazione del calcio intracellulare e la migrazione cellulare diretta. Riferimenti correlati: PMID:18802065, PMID:39093700, PMID:8752281
• Si lega anche al recettore chemochinico atipico ACKR3 (CXCR7), che funge da recettore spazzino e attiva la via di segnalazione della beta-arrestina. Riferimenti correlati: PMID:16107333, PMID:19255243
• CXCL12 può attivare le integrine ITGAV:ITGB3, ITGA4:ITGB1 e ITGA5:ITGB1 tramite un sito di legame allosterico, indipendentemente da CXCR4. Riferimenti correlati: PMID:29301984
• Regola positivamente la migrazione dei monociti e negativamente l'adesione dei monociti tramite un meccanismo mediato dalla chinasi LYN che inibisce il legame di LFA-1 a ICAM-1. Riferimenti correlati: PMID:18802065
• Una forma troncata, SDF-1-alfa(3-67), mostra una ridotta attività chemiotattica; il legame ai proteoglicani della superficie cellulare inibisce la sua formazione, preservando quindi localmente l'attività di CXCL12 a lunghezza intera. Riferimenti correlati: PMID:14525775
• Le isoforme alfa e beta sono espresse in modo ubiquitario con i livelli più alti nel fegato, pancreas e milza, mentre l'isoforma gamma è espressa principalmente nel cuore, e le isoforme delta, epsilon e theta mostrano la massima espressione nel pancreas.
• La proteina secreta matura contiene importanti caratteristiche strutturali, tra cui due ponti disolfuro e un peptide segnale, con un peso molecolare di circa 11 kDa.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 40–93 di CXCL12 umano (NP_000600.1), una regione compresa nel dominio della chemochina matura; pertanto, si prevede che l'anticorpo riconosca la proteina secreta. Per Western blot, preparare i campioni in condizioni riducenti e utilizzare un protocollo standard di SDS-PAGE. Considerare un intervallo di diluizione iniziale di 1:500–1:2000, da ottimizzare successivamente.
• Per IHC-P, eseguire il recupero dell'antigene indotto dal calore e validare la colorazione con controlli tissutali appropriati. CXCL12 è una proteina secreta, quindi si possono osservare pattern di colorazione extracellulare.
• Nell'IF/ICC, considerare l'uso di un inibitore della secrezione (es. brefeldina A) per aumentare il segnale intracellulare; ottimizzare le condizioni di fissazione/permeabilizzazione. L'anticorpo può etichettare il Golgi e la via secretoria.
• L'anticorpo reagisce in modo crociato con CXCL12 di topo e ratto, rendendolo adatto per studi su queste specie. Tuttavia, confermare sempre la specificità nel sistema modello pertinente.
• A causa dello splicing alternativo, possono essere rilevate più bande in WB; confrontare con i pesi molecolari noti delle isoforme (alfa ~11 kDa). Utilizzare un controllo positivo (es. CXCL12 ricombinante o linee cellulari che lo esprimono a livelli elevati) per verificare la reattività.

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