Anticorpo monoclonale coniglio anti-CXCR4 per WB, ELISA - P61073

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CXCR4

• Il CXCR4 (recettore della chemochina di tipo C-X-C, CD184, Fusin) è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che si lega specificamente alla chemochina CXCL12/SDF-1. Il legame del ligando innesca la trasduzione del segnale aumentando i livelli intracellulari di ioni calcio, potenziando l'attivazione di MAPK1/MAPK3 e inibendo l'adenilato ciclasi tramite l'accoppiamento alle proteine Gi. Riferimenti correlati: PMID:10074102, PMID:10452968, PMID:10644702, PMID:16725153, PMID:17197449, PMID:18799424, PMID:39093700
• La segnalazione del CXCR4 coinvolge la via AKT e regola la migrazione cellulare, svolgendo un ruolo critico nella guarigione delle ferite. Riferimenti correlati: PMID:24912431, PMID:28978524
• Oltre al CXCL12, il CXCR4 agisce come recettore per l'ubiquitina extracellulare (elevando il calcio intracellulare e riducendo il cAMP) e per il lipopolisaccaride batterico (LPS), mediando la secrezione di citochine infiammatorie (TNF) da parte dei monociti. Riferimenti correlati: PMID:20228059, PMID:11276205
• Nell'infezione virale, il CXCR4 funge da corecettore (insieme al CD4) per gli isolati X4 del virus dell'immunodeficienza umana-1 (HIV-1) e come recettore primario per alcuni isolati HIV-2, promuovendo l'ingresso virale. Riferimenti correlati: PMID:10074122, PMID:10756055, PMID:8849450
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente alla membrana plasmatica, alle giunzioni cellulari e attraverso il ciclo degli endosomi precoci, endosomi tardivi e lisosomi.
• Le modificazioni post-traduzionali includono solfazione, fosforilazione, glicosilazione e la formazione di legami disolfuro; è anche soggetto a ubiquitinazione. Il recettore è un proteoglicano.
• Il CXCR4 è ampiamente espresso, con l'isoforma 1 predominante, nei tessuti inclusi i leucociti del sangue periferico, la milza, il timo, il midollo spinale, il cuore, la placenta, il polmone, il fegato, il muscolo scheletrico, il rene, il pancreas, il cervello (cerebello, corteccia cerebrale, midollo, microglia, astrociti) e le cellule endoteliali. Lo splicing alternativo produce varianti aggiuntive.
• Per analogia, il CXCR4 contribuisce all'ematopoiesi, alla formazione del setto ventricolare cardiaco, alla vascolarizzazione del tratto gastrointestinale e allo sviluppo dei neuroni del cervelletto/ippocampo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione intracellulare C-terminale (aa 253-352), suggerendo che l'anticorpo probabilmente mira a un epitopo all'interno del dominio citoplasmatico. Per il Western blot, si raccomandano condizioni denaturanti e riducenti per esporre l'epitopo.
• Nel Western blot, il peso molecolare previsto del CXCR4 è di circa 40 kDa; tuttavia, a causa della glicosilazione e di altre modificazioni post-traduzionali, la banda apparente può spostarsi verso un peso molecolare superiore in determinati tipi cellulari.
• Per le applicazioni ELISA, considerare l'abbinamento con un anticorpo di rilevamento mirato a un epitopo extracellulare distinto se si sviluppa un test sandwich. Validare sempre le condizioni del saggio con appropriati controlli positivi e negativi.
• Poiché il CXCR4 è espresso in molte cellule immunitarie ed endoteliali, buoni lisati di controllo positivo includono Jurkat, THP-1 o PBMC; per i tessuti, la milza o il timo possono funzionare bene.
• Se si studia la funzione di corecettore dell'HIV, notare che l'anticorpo potrebbe non bloccare l'ingresso virale in quanto mira a un epitopo intracellulare.

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