Anticorpo policlonale Anti-CYP2F1 per WB, IHC-P, ELISA - P24903

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CYP2F1

• Il citocromo P450 2F1 (CYP2F1) è un membro della superfamiglia delle monoossigenasi del citocromo P450, che catalizzano l'ossidazione di sostanze organiche e sono fondamentali per il metabolismo di xenobiotici e composti endogeni.
• Questo enzima può partecipare al metabolismo di diversi pneumotossicanti, incluso il naftalene, ed è in grado di dealchilare etoxicumarina, propoxicumarina e pentossiresorufina, sebbene non mostri attività verso l'etossiprorufina e presenti solo una traccia di attività di dearilazione verso la benossiprorufina.
• CYP2F1 bioattiva il 3-metilindolo (3MI) tramite dehydrogenazione nell'elettrofilo putativo 3-metilene-indolenina, un composto implicato nella tossicità polmonare.
• Questa proteina si localizza sulla membrana del reticolo endoplasmatico e sulla membrana dei microsomi, in linea con il suo ruolo nel sistema delle monoossigenasi microsomiali.
• L'espressione tissutale è prevalentemente polmonare, con rilevazioni rare in fegato e placenta, il che evidenzia la sua funzione specializzata nel metabolismo delle vie respiratorie.
• CYP2F1 contiene un gruppo prostetico eme e un cofattore ferro, essenziali per la sua attività catalitica, ed è classificato come ossidoreduttasi. È stata riportata l'esistenza di splicing alternativi del gene CYP2F1, che può produrre diverse isoforme.
• Il peso molecolare calcolato dell'isoforma canonica è di circa 55,5 kDa, in linea con la banda osservata a 56 kDa su SDS-PAGE.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 100–290 di CYP2F1 umano, una regione probabilmente localizzata nel dominio citoplasmatico che può presentare una conservazione sufficiente tra le specie a consentire l'osservata reattività incrociata con uomo, topo e ratto.
• Per Western blot, è possibile esplorare una diluizione iniziale tipica per anticorpi policlonali (ad esempio 1:500–1:2000) e il saggio deve essere validato in una linea cellulare derivata da polmone o in un lisato di tessuto in cui è attesa l'espressione di CYP2F1.
• In IHC-P, possono essere necessari metodi di recupero dell'antigene (ad esempio, recupero epitopico indotto da calore a pH 6 o 9); includere controlli appropriati come sezioni di tessuto polmonare. Si raccomanda un test preliminare con diversi protocolli di fissazione.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento in formato sandwich, ma è necessario valutare la reattività incrociata con altri membri della famiglia CYP a causa delle similarità di sequenza.
• Poiché CYP2F1 è una proteina di membrana, si consiglia di utilizzare detergenti delicati nei buffer di lisi (ad esempio 1% NP-40 o Triton X-100) per garantire una corretta solubilizzazione.

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