Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CYP51A1 per WB, IHC-P, ELISA - Q16850

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CYP51A1

• CYP51A1, noto anche come lanosterolo 14-alfa demetilasi, appartiene alla superfamiglia del citocromo P450 ed è l'unico enzima citocromo P450 conservato in tutti i regni biologici (batteri, funghi, piante e animali). È un enzima chiave nella via di biosintesi degli steroli responsabile della conversione del lanosterolo in colesterolo nei mammiferi.
• Attività catalitica: Catalizza la rimozione ossidativa in tre fasi del gruppo 14alfa-metile (C-32) degli steroli come il lanosterolo e il 24,25-diidrolanosterolo, producendo formiato e convertendoli rispettivamente in 4,4-dimetil-5alfa-colesta-8,14,24-trien-3beta-olo e 4,4-dimetil-8,14-colestadien-3beta-olo. Questi sono intermedi critici nella biosintesi del colesterolo. Riferimenti correlati: PMID:20149798, PMID:8619637, PMID:9559662
• L'enzima è una proteina integrale di membrana localizzata al reticolo endoplasmatico e alle membrane microsomiali, coerente con il suo ruolo nel metabolismo lipidico.
• Contiene un gruppo prostatico eme e richiede ferro come cofattore, caratteristico dell'attività monossigenasi che utilizza ossigeno molecolare e NADPH.
• CYP51A1 exhibits una vasta specificità di substrato; oltre agli steroli mammiferi, può demetilare substrati non mammiferi come l'eburicol, sebbene con minore efficienza. Riferimenti correlati: PMID:9559662
• La proteina è espressa ubiquitariamente, con i livelli più alti osservati nel testicolo, ovaio, surrene, prostata, fegato, rene e polmone, riflettendo l'alta domanda di colesterolo nei tessuti steroideogenici e nella sintesi delle membrane.
• Lo splicing alternativo genera varianti di trascrizione multiple, potenzialmente modulando la funzione o la regolazione dell'enzima.
• Le modifiche post-traduzionali includono la coniugazione ubiquitina-like (Ubl), che può influenzare la stabilità, la localizzazione o l'attività della proteina.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato è una proteina ricombinante corrispondente agli amminoacidi 400-500 del CYP51A1 umano, mirando alla regione C-terminale. Questa regione è probabilmente ben esposta nelle condizioni native e denaturate, rendendo l'anticorpo adatto a più applicazioni.
• Per l'analisi Western blot (WB), è prevista una banda a circa 57 kDa. Considerare l'uso di marcatori di peso molecolare appropriati e validare la specificità utilizzando linee cellulari o tessuti CYP51A1-positivi (es. fegato, testicolo).
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene. Testare su tessuti di controllo positivi noti come il fegato o la ghiandola surrenale e includere controlli isotipici per confermare i modelli di colorazione specifici al reticolo endoplasmatico.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di rilevamento o di cattura. Abbinare a uno standard appropriato, come l'immunogeno ricombinante o la proteina CYP51A1 purificata, e validare nella matrice di campione pertinente.
• Data l'alta omologia di sequenza tra CYP51A1 umano, murino e del ratto, è prevista la reattività incrociata. Tuttavia, si consiglia la validazione sperimentale in ogni specie se utilizzato per campioni non umani.
• Durante la manipolazione, conservare alle temperature raccomandate ed evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento per preservare l'attività.

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