Anticorpo Monoclonale di Coniglio Anti-DARPP32 per WB, ELISA - Q9UD71

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di DARPP32 (PPP1R1B)

• DARPP32, codificata dal gene PPP1R1B, è una molecola di trasduzione del segnale bifunzionale che integra i segnali della dopamina e del cAMP attraverso la sua regolazione della fosfatasi proteica 1 (PP1) e della proteina chinasi A (PKA).
• Agisce come un potente inibitore della PP1 quando fosforilata in Thr34 dalla PKA, portando all'alterazione della fosforilazione dei substrati neuronali a valle e alla modulazione della plasticità sinaptica.
• La proteina è anche fosforilata in Thr75 dalla chinasi 5 dipendente dalle cicline (CDK5), il che la converte in un inibitore della PKA, dimostrando il suo ruolo di interruttore molecolare nei neuroni striatali.
• DARPP32 è prevalentemente citoplasmatica e altamente arricchita nei neuroni spinosi medi dello striato, dove media gli effetti della dopamina, del glutammato e di altri neurotrasmettitori.
• Lo splicing alternativo del trascritto di PPP1R1B produce molteplici isoforme, inclusa una forma completa ben caratterizzata e una variante troncata, che possono avere proprietà funzionali distinte.
• Modificazioni post-traduzionali come l'acetilazione e la fosforilazione in più siti ne affinano l'attività, la stabilità e la distribuzione subcellulare.
• La disregolazione della segnalazione di DARPP32 è stata associata a disturbi neurologici e psichiatrici, inclusi il morbo di Parkinson, la schizofrenia e la tossicodipendenza.
• Il peso molecolare teorico dell'isoforma canonica è di circa 23 kDa, coerente con la banda osservata nel Western blot.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per il Western blot, utilizzare un tampone RIPA preparato fresco contenente inibitori delle fosfatasi e delle proteasi per preservare lo stato di fosforilazione di DARPP32.
• Considerare l'uso di un tampone di caricamento riducente e riscaldare i campioni a 70°C per 10 minuti per evitare artefatti di aggregazione comunemente osservati con DARPP32.
• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (aa1-100); questo anticorpo dovrebbe riconoscere sia la forma completa che alcuni frammenti N-terminali.
• A causa dell'elevata conservazione della sequenza, convalidare la specificità dell'anticorpo in campioni knockout o con knockdown da siRNA, specialmente quando si lavora con tessuti di topo o ratto.
• Per l'ELISA, determinare la concentrazione ottimale di rivestimento tramite titolazione a scacchiera utilizzando come standard il peptide immunizzante o la proteina DARPP32 ricombinante.
• Includere in ogni esperimento un controllo positivo noto (ad es., lisato di tessuto striatale) e un controllo negativo (ad es., linea cellulare non neuronale).
• Poiché DARPP32 è una fosfoproteina a bassa abbondanza in alcuni campioni, per la rilevazione potrebbero essere necessarie strategie di potenziamento del segnale come l'uso di substrati ECL ad alta sensibilità.

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