Anticorpo policlonale di coniglio Anti-DDIT3/CHOP per WB, IHC-P, IP, ELISA - P35638

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di DDIT3/CHOP

• DDIT3 (DNA damage-inducible transcript 3, trascritto 3 indotto da danno al DNA), chiamato anche CHOP (proteina omologa a C/EBP), CHOP-10 e GADD153, è un membro della famiglia dei fattori di trascrizione C/EBP che agisce come inibitore dominante-negativo della trascrizione mediata da C/EBP.
• Funge da mediatore centrale della risposta allo stress del reticolo endoplasmatico (ER), innescando l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi in diverse condizioni di stress. Riferimenti correlati: PMID:15322075 PMID:15775988 PMID:19672300
• DDIT3 forma eterodimeri con altre proteine C/EBP, alterandone la capacità di legame al DNA e reprimendo l'espressione genica bersaglio.
• Come regolatore trascrizionale, induce geni pro-apoptotici come TRIB3, BBC3/PUMA e BCL2L11/BIM, mentre sopprime l'espressione dei geni anti-apoptotici BCL2 e MYOD1. Riferimenti correlati: PMID:15775988 PMID:17709599 PMID:20876114 PMID:18940792 PMID:19672300 PMID:20829347
• DDIT3 regola negativamente la via di segnalazione canonica Wnt legandosi a TCF7L2/TCF4 e bloccandone l'attività trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:16434966
• La proteina si sposta dinamicamente tra citoplasma e nucleo, accumulandosi nel nucleo in caso di stress del reticolo endoplasmatico per orchestrare i programmi di espressione genica.
• DDIT3 è soggetto a modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione e coniugazione con proteine ubiquitino-simili, che possono modurarne l'attività e il turn-over.
• Oltre all'apoptosi, DDIT3 partecipa alle risposte infiammatorie promuovendo la maturazione di IL-1β dipendente dalla caspase-11 (CASP4) e contribuisce alla vascularizzazione postnatale tramite la regolazione di NOS3.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo corrisponde alla regione N-terminale (amminoacidi 1–100) del DDIT3 umano, un dominio relativamente conservato; la reattività crociata con topo e ratto è stata confermata sperimentalmente, ma per altre specie è necessario verificare l'allineamento della sequenza.
• Per western blot (WB): rilevare una banda di circa 19 kDa; si noti che modifiche post-traduzionali o isoforme indotte da stress possono produrre bande aggiuntive. Ottimizzare il blocco e la diluizione dell'anticorpo per ridurre al minimo il fondo, poiché le preparazioni policlonali possono presentare legame non specifico.
• Per immunoistochimica (IHC-P): si raccomanda il recupero dell'antigene; convalidare la colorazione in sezioni di tessuto con stress del reticolo endoplasmatico o apoptosico, dove DDIT3 è sovraregolato.
• Per immunoprecipitazione (IP): l'anticorpo lega un epitopo lineare del peptide e dovrebbe catturare efficacemente il DDIT3 nativo; includere controlli positivi e negativi appropriati per confermare la specificità.
• Per ELISA: adatto per quantificare DDIT3 in lisati cellulari o campioni di siero; abbinarlo a un anticorpo di rilevamento corrispondente se si sviluppa un test sandwich.
• Essendo un anticorpo policlonale, la coerenza tra lotti può variare; si consiglia di conservare un lotto di riferimento per studi a lungo termine.

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