Anticorpo Policlonale Anti-DDOST per WB, IHC-P, ELISA - P39656

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di DDOST

• Identità proteica e isoforme: DDOST codifica per la subunità 48 kDa della dolichil-difosfooligosaccaride--proteina glicosiltransferasi, anche designata OST48, WBP1, AGER1 e CDG1R. Lo splicing alternativo produce multiple isoforme.
• Funzione centrale nella glicosilazione: La proteina è una subunità essenziale del complesso oligosaccariltransferasi (OST), che catalizza il trasferimento in blocco di un glicano ad alto mannosio preassemblato (Glc3Man9GlcNAc2) dal dolichol-pirofosfato ai residui di asparagina nei polipeptidi nascenti all'interno del reticolo endoplasmatico rugoso (RE) (PubMed:31831667).
  Riferimenti correlati:
  PMID:31831667
• Meccanismo cotraduzionale: L'attività dell'OST è accoppiata alla traslocazione proteica attraverso il traslocone Sec61, consentendo alla N-glicosilazione di avvenire cotraduzionalmente sul lato luminale della membrana del RE.
• Assemblaggio del complesso OST: DDOST è necessaria per l'assemblaggio sia dei complessi OST contenenti STT3A che STT3B, che mediano rispettivamente la glicosilazione co‑ e post‑traduzionale (PubMed:22467853).
  Riferimenti correlati:
  PMID:22467853
• Localizzazione subcellulare: La proteina è un componente integrale di membrana del reticolo endoplasmatico con un peptide segnale e multipli domini transmembrana.
• Rilevanza clinica: Mutazioni in DDOST sono associate a disturbi congeniti della glicosilazione, evidenziandone l'importanza nella salute umana e nelle malattie.
• Peso molecolare: Il polipeptide canonico di DDOST ha una massa molecolare calcolata di circa 50.8 kDa (UniProt), mentre la proteina matura migra a circa 51 kDa su SDS‑PAGE.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno (proteina ricombinante che copre gli amminoacidi 40–300) corrisponde al dominio luminale di DDOST umano, generando probabilmente anticorpi che riconoscono epitopi sia nativi che denaturati. Per il WB, sono appropriate condizioni denaturanti e riducenti.
• Quando si esegue IHC-P, il recupero dell'antigene con trattamento termico o enzimatico può migliorare il rilevamento; si consiglia l'inclusione di un tessuto di controllo positivo noto come fegato o pancreas.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per il rilevamento diretto o di cattura di DDOST ricombinante o endogeno in lisati di cellule e tessuti. È stata riportata reattività crociata con DDOST di topo e ratto, quindi si consigliano esperimenti di titolazione per ciascuna specie.
• L'ottimizzazione del segnale potrebbe richiedere la determinazione empirica della diluizione dell'anticorpo. Iniziare con 1:500–1:2000 per il WB e 1:200 per l'IHC-P e regolare secondo necessità.
• Poiché DDOST è una proteina residente nel RE espressa ubiquitariamente, può servire come controllo di caricamento o standard di riferimento per studi di glicosilazione.

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