Anticorpo policlonale coniglio Anti-DiMethyl-DNMT3A-K44 (O88508) per IF/ICC ed ELISA

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della DNA (citosina-5)-metiltransferasi 3A (DNMT3A)

• DNMT3A è un enzima chiave necessario per la metilazione de novo del DNA a livello genomico, essenziale per l'istituzione dei pattern di metilazione durante lo sviluppo. Modifica il DNA in modo non processivo e può metilare sia siti CpG che non-CpG.
• L'enzima funziona in coordinazione con le modifiche istoniche, metilando preferenzialmente il DNA linker tra i nucleosomi ed è inibito dall'istone H1. Gioca anche un ruolo nell'imprinting paterno e materno, con la metilazione della maggior parte dei loci imprintati nelle cellule germinali.
• DNMT3A agisce come un corepressore trascrizionale, ad esempio interagendo con ZBTB18, e può reprimere la trascrizione tramite il reclutamento dell'attività HDAC. Viene reclutato in regioni genomiche marcate dall'istone H3 trimetilata alla Lisi36 (H3K36me3).
• A livello subcellulare, DNMT3A si localizza prevalentemente nel nucleo ed è associata ai cromosomi, accumulandosi nelle ripetizioni satellitari maggiori dell'eterocromatina pericentrica. Può essere trovata anche nel citoplasma.
• Esistono due isoforme: l'isoforma 1 è espressa ubiquitariamente a bassi livelli, mentre l'espressione dell'isoforma 2 è limitata ai tessuti che subiscono attiva metilazione de novo, come milza, testicolo e timo.
• La proteina subisce multiple modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione (es. a Ser102, Ser239, Ser251, Ser386, Ser389, Thr120, Thr257), la metilazione (es. omega-N-metilarginina ad Arg167) e l'auto-metilazione su Cys706.

Riferimenti correlati: PMID:10555141, PMID:11399089, PMID:11919202, PMID:16567415, PMID:17713477, PMID:9662389, PMID:11350943, PMID:18823905, PMID:15215868, PMID:20547484, PMID:21481189, PMID:12138111, PMID:15456878, PMID:21183079, PMID:24129315

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico dimetilato alla Lisi44 del DNMT3A murino. Per IF/ICC, considerare che questa modifica può essere specifica per il contesto; validare nel proprio sistema confrontando i segnali tra il blocco con peptide metilato e non metilato o utilizzando controlli knockout/knockdown.
• Le applicazioni ELISA possono beneficiare dell'uso del peptide immunizzante come controllo positivo e di un peptide non modificato come controllo negativo per confermare la specificità dimetilica.
• Data la reattività crociata con umano e ratto, questo anticorpo potrebbe essere adatto per studiare siti di metilazione conservati attraverso le specie, ma confermare la reattività specifica della specie nei propri saggi.
• Le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente; gli intervalli tipici per IF/ICC ed ELISA dipendono dall'applicazione e devono essere ottimizzati dall'utente finale.

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