Anticorpo monoclonale coniugato anti-DKK3 per WB/IF/ICC/ELISA - Q9UBP4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di DKK3

• DKK3 (proteina correlata a Dickkopf 3), nota anche come REIC o RIG, è una glicoproteina secreta appartenente alla famiglia degli antagonisti Wnt di Dickkopf. Contiene un peptide segnale, due domini ricchi di cisteina e regioni coiled-coil.
• DKK3 antagonizza la segnalazione canonica Wnt/β-catenina legandosi ai co-recettori LRP5/6 e promuovendone l'internalizzazione tramite le proteine transmembrana KREMEN, inibendo così l'interazione ligando-recettore Wnt.
• Questa proteina svolge ruoli critici nello sviluppo embrionale, inclusi la modellazione assiale anteroposteriore, la morfogenesi degli arti, la somitogenesi e la formazione degli occhi, modulando localmente l'attività Wnt.
• Nei tessuti adulti, DKK3 è implicata nell'omeostasi ossea, nella soppressione tumorale (spesso regolata negativamente nei tumori) e in processi neurodegenerativi come la malattia di Alzheimer, sebbene queste ultime funzioni siano dedotte per somiglianza.
• La localizzazione subcellulare è esclusivamente extracellulare: DKK3 viene secreta nello spazio extracellulare e non sembra essere legata alla membrana o intracellulare.
• L'espressione è più alta nel cuore, nel cervello e nel midollo spinale, con livelli inferiori in altri tessuti, suggerendo funzioni regolatorie specifiche per tessuto.
• Le modifiche post-traduzionali includono N-glicosilazione e formazione di legami disolfuro, tipiche delle proteine secrete a nodo di cisteina, che possono influenzarne la stabilità e l'attività.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 200–350 di DKK3 umano, coprendo la regione C-terminale ricca di motivi coiled-coil. Questa regione può rilevare DKK3 a lunghezza intera e potenzialmente alcuni prodotti di scissione; verificare il peso molecolare nel proprio sistema.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto è di circa 38 kDa (calcolato dalla sequenza amminoacidica). La glicosilazione può causare una migrazione leggermente superiore della banda osservata. Utilizzare controlli appropriati.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), poiché DKK3 è una proteina secreta, includere un agente bloccante del Golgi (es. BFA) può migliorare la colorazione intracellulare se si desidera la ritenzione; altrimenti, considerare di analizzare DKK3 secreta nei surnatanti cellulari tramite ELISA.
• L'anticorpo è testato per applicazioni ELISA; può essere utilizzato per la cattura o il rilevamento dell'antigene a seconda del formato del saggio. Eseguire test di reattività incrociata con la propria matrice specifica.
• Nonostante la reattività incrociata riportata con topo e ratto, l'omologia di sequenza nella regione dell'immunogeno è elevata; tuttavia, convalidare la reattività in tessuti specifici per specie.
• Titolare sempre l'anticorpo nelle proprie condizioni di saggio per un rapporto segnale-rumore ottimale.

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