Anticorpo monoclonale coniglio Anti-DLAT per WB, ELISA - P10515

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di DLAT

• DLAT codifica per la componente diidrolipolilisina-residuo acetiltransferasi del complesso piruvato deidrogenasi (PDC-E2). È anche noto come autoantigene mitocondriale da 70 kDa della cirrosi biliare primitiva (PBC), subunità da 70 kDa del complesso antigenico M2 e PDCE2.
• In quanto parte del complesso piruvato deidrogenasi (PDH), DLAT catalizza il trasferimento di gruppi acetile dalle porzioni acetil-lipoil al coenzima A, formando acetil-CoA. Questa reazione collega la glicolisi citoplasmatica al ciclo del triossido di carbonio (TCA) mitocondriale.
• Il complesso PDH è un grande assemblaggio multienzimatico contenente più copie di tre enzimi: piruvato deidrogenasi (E1), diidrolipoamide acetiltransferasi (E2) e diidrolipoamide deidrogenasi (E3). DLAT svolge la funzione di componente E2.
• DLAT si localizza nella matrice mitocondriale, dove il complesso PDH è attivo.
• La proteina subisce lipoilazione e acetilazione, modifiche post-traduzionali essenziali per la sua funzione enzimatica e la sua regolazione.
• DLAT è una transferasi che svolge un ruolo chiave nel metabolismo dei carboidrati e del glucosio, in particolare nel ciclo TCA.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente agli amminoacidi 548–647 del DLAT umano, una regione C-terminale. Tenere conto di questo progetto dell'antigene quando si valuta la specificità dell'epitopo.
• Per il Western blotting, si osserva una banda attesa a circa 69 kDa (peso molecolare teorico ~69 kDa). L'uso di lisati arricchiti di mitocondri può aumentare la sensibilità della rilevazione.
• Convalidare la reattività nelle specie pertinenti: linee cellulari o estratti di tessuto di uomo, topo e ratto. Includere controlli positivi e negativi appropriati.
• Per le applicazioni ELISA, si consiglia di utilizzare rivestimento con proteina DLAT ricombinante o peptide; ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e il sistema di rilevazione per il vostro formato di saggio specifico.
• Poiché DLAT è un enzima mitocondriale, assicurarsi che i protocolli di preparazione dei campioni estraggano efficacemente le proteine mitocondriali.

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