Anticorpo policlonale di coniglio Anti-DLD/DLDH per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P09622

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di DLD/DLDH

• DLD/DLDH è un enzima mitocondriale che funziona come componente E3 dei complessi piruvato deidrogenasi, α-chettoglutarato deidrogenasi e α-chetoacido deidrogenasi a catena ramificata, ed è anche componente del sistema di scissione della glicina. Catalizza la riossidazione della diidrolipoamide utilizzando NAD+ come accettore di elettroni (PubMed:15712224, PubMed:16442803, PubMed:16770810, PubMed:20160912). Riferimenti correlati: PMID:15712224, PMID:16442803, PMID:16770810, PMID:20160912
• Una frazione del complesso α-chettoglutarato deidrogenasi si localizza nel nucleo, dove DLD/DLDH fornisce succinil-CoA all'istone succiniltransferasi KAT2A, contribuendo alla succinilazione della lisina degli istoni sulla cromatina (PubMed:29211711). Riferimenti correlati: PMID:29211711
• Nella sua forma monomerica, DLD/DLDH può svolgere un'ulteriore funzione "moonlighting" come serina proteasi (PubMed:17404228). Riferimenti correlati: PMID:17404228
• La proteina è coinvolta nell'iperattivazione degli spermatozoi durante la capacazione ed è implicata nella reazione acrosomiale, evidenziando un suo ruolo nella riproduzione (Per similarità).
• DLD/DLDH è localizzato principalmente nella matrice mitocondriale, ma si trova anche nel nucleo, nell'acrosoma delle vescicole secretorie e nel flagello/ciglio, riflettendo i suoi ruoli multifunzionali tra i diversi compartimenti.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono un cofattore FAD, un centro disolfuro redox-attivo e un peptide di transito mitocondriale. La proteina è soggetta ad acetilazione, fosforilazione e splicing alternativo, che generano multiple isoforme.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde a una regione (amminoacidi 36–300) comune a tutte le isoforme umane conosciute di DLD, il che suggerisce un'ampia reattività tra le isoforme; in ogni caso, convalidare l'anticorpo per la specifica isoforma di interesse.
• Per il western blot (WB), il peso molecolare atteso è di circa 54 kDa; si ricorda che modifiche post-traduzionali come l'acetilazione o la fosforilazione possono causare minori spostamenti della banda.
• Per IHC-P e IF/ICC, è necessario ottimizzare i passaggi appropriati di recupero dell'antigene e permeabilizzazione; tenere conto della doppia localizzazione mitocondriale e nucleare nella selezione delle condizioni di fissazione e rilevamento.
• L'anticorpo presenta reattività crociata con il DLD di topo, consentendone l'uso in modelli murini; convalidare sempre l'anticorpo nel tessuto o tipo cellulare di riferimento prima dell'esecuzione del test.
• È possibile sviluppare protocolli ELISA per misurare i livelli di DLD/DLDH in siero, plasma o lisati tissutali; utilizzare l'immunogeno ricombinante come controllo positivo.

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