Anticorpo policlonale di coniglio anti-DNA topoisomerasi I (TOP1) per WB, IHC-P, IP, ELISA - P11387

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della DNA topoisomerasi I

• La DNA topoisomerasi I (TOP1) è un enzima codificato dal gene TOP1, con un peso molecolare di circa 91 kDa (UniProt: P11387). È nota anche come DNA topoisomerasi I.
• La TOP1 allevia il superavvolgimento e la tensione torsionale del DNA durante la replicazione e la trascrizione, scindendo temporaneamente un filamento di DNA, formando un intermedio covalente, ruotando il filamento libero e quindi rilegando la rottura.
• Regola lo splicing alternativo del pre-mRNA del fattore tissutale (F3) nelle cellule endoteliali, evidenziando un ruolo nell'espressione genica correlata alla coagulazione.
• La TOP1 contribuisce alla regolazione del ritmo circadiano modulando la struttura della cromatina in corrispondenza degli elementi di risposta ROR sul promotore di BMAL1, influenzando la trascrizione dei geni fondamentali dell'orologio circadiano.
• La proteina è localizzata nel nucleo, con presenza sia nel nucleolo sia nel nucleoplasma.
• La TOP1 è espressa nelle cellule endoteliali, oltre che in altri tessuti.
• Le modificazioni post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, e la proteina è stata implicata come proto-oncogene nei riarrangiamenti cromosomici.
• È una fosfoproteina ed è soggetta a ubiquitinazione e alla formazione di legami isopeptidici, riflettendo un complesso controllo regolatorio.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico della regione N-terminale (aa 1-100), pertanto è probabile che l'anticorpo riconosca la proteina a lunghezza intera. Per il Western blot, prevedere una banda intorno a 91 kDa; prendere in considerazione l'uso di opportuni controlli di caricamento e l'ottimizzazione delle condizioni di blocco.
• Per la IHC-P, possono essere necessari metodi di recupero antigenico per esporre l'epitopo; validare la colorazione in tessuti positivi noti, come quelli ricchi di cellule endoteliali.
• Nell'immunoprecipitazione, verificare l'efficienza di cattura in lisati cellulari pertinenti che esprimono TOP1 e utilizzare controlli negativi appropriati, ad esempio IgG.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; se necessario, abbinarlo a un anticorpo compatibile e validare la sensibilità utilizzando standard di proteina ricombinante.

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