Anticorpo Monoclonale di Coniglio Anti-DNMT1 per WB, IHC-P, IP, ELISA - P26358

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di DNMT1

• Identità Proteica e Isoforme: DNMT1 (DNA (citosina-5)-metiltransferasi 1) è una proteina con dita di zinco di tipo CXXC con alias MCMT, CXXC9 e DNA metiltransferasi HsaI. Esistono multiple isoforme; l'isoforma 2 è meno espressa dell'isoforma canonica 1.
• Metilazione del DNA di Mantenimento: Funge da principale DNA metiltransferasi di mantenimento, metilando preferenzialmente siti CpG emimetilati per preservare i pattern di metilazione durante la replicazione del DNA. Si associa ai foci di replicazione nella fase S. Riferimenti correlati: PMID:17200670, PMID:21745816, PMID:26070743
• Associazione alla Cromatina durante il Ciclo Cellulare: Oltre all'associazione in fase S, DNMT1 si lega alla cromatina durante le fasi G2 e M, contribuendo al mantenimento della metilazione del DNA indipendente dalla replicazione. Riferimenti correlati: PMID:21745816
• Repressione Trascrizionale: Media la repressione trascrizionale attraverso l'interazione diretta con HDAC2, e coordina la metilazione del DNA con le modificazioni istoniche per regolare l'espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:10888872, PMID:16357870
• Doppio Ruolo nel Silenziamento e Attivazione Genica: Forma complessi corepressori che promuovono l'ipermetilazione mediata da KRAS e il silenziamento di geni oncosoppressori nelle cellule del cancro colorettale; mantiene anche stati di cromatina repressiva nelle cellule staminali embrionali. Al contrario, può partecipare all'attivazione genica (es., BAG1) attraverso la modulazione della dimetilazione dell'istone H3K4 e H3K9 in complesso con DNMT3B e CTCFL/BORIS. Riferimenti correlati: PMID:24623306, PMID:18413740
• Localizzazione Subcellulare ed Espressione Tissutale: Predominantemente nucleare, associata ai cromosomi. Espressa in modo ubiquitario; altamente abbondante nei tessuti fetali, cuore, rene, placenta e cellule mononucleate del sangue periferico, con livelli inferiori in milza, polmone, cervello, intestino tenue, colon, fegato e muscolo scheletrico.
• Modificazioni Post-Traduzionali e Associazioni con Malattie: Soggetta ad acetilazione, fosforilazione e ubiquitinazione. Mutazioni in DNMT1 sono associate a neuropatia sensoriale ereditaria e atassia cerebellare autosomica dominante, sordità e narcolessia (ADCADN).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 1–100 all'N-terminale di DNMT1 umano; considerare l'uso di un saggio di blocco con peptide per confermare la specificità se necessario.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è ~183 kDa. Utilizzare un gel di acrilammide a bassa percentuale (es., 6–8%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare.
• Nell'IHC-P, eseguire un appropriato recupero dell'antigene e validare la colorazione utilizzando controlli tissutali positivi e negativi (es., cuore, placenta o colon).
• È riportato che l'anticorpo reagisce in modo crociato con campioni umani, di topo e di ratto. Quando si estende ad altre specie, verificare sperimentalmente la reattività.
• Per l'immunoprecipitazione e l'ELISA, seguire i protocolli standard e includere controlli appropriati per tenere conto di potenziali legami aspecifici.

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