Anticorpo monoclonale di coniglio anti-DNMT3B per WB, ChIP, ELISA - Q9UBC3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della DNMT3B

• La DNMT3B è una DNA (citosina-5)-metiltransferasi che catalizza la metilazione de novo del DNA, definendo pattern di metilazione fondamentali per lo sviluppo embrionale e la differenziazione cellulare.
• Metila preferenzialmente il DNA nucleosomale nella regione centrale e può coordinare la metilazione del DNA con le modificazioni degli istoni per regolare la struttura della cromatina e l'espressione genica.
• Esistono molteplici isoforme generate da splicing alternativo; le isoforme 1, 3 e probabilmente 2 sono funzionali, mentre le isoforme 4 e 5 sono prive dei motivi conservati della metiltransferasi e sono probabilmente cataliticamente inattive.
• Oltre al suo ruolo catalitico, la DNMT3B agisce come corepressore trascrizionale interagendo con CBX4 e ZHX1 e mediando il silenziamento genico indipendentemente dall'attività di metilazione.
• In associazione con DNMT1 e con il fattore CTCFL/BORIS, la DNMT3B modula la dimetilazione degli istoni H3K4 e H3K9 a livello del promotore di BAG1, contribuendo all'attivazione trascrizionale.
• La DNMT3B è necessaria per il silenziamento del gene DUX4 nelle cellule somatiche; la sua disregolazione è associata alla distrofia muscolare facio-scapolo-omerale di tipo 4 (FSHD4). Riferimenti correlati: PMID:27153398
• Localizzata nel nucleo, la DNMT3B è ampiamente espressa, con livelli elevati nel fegato fetale, nel cuore, nei reni e nella placenta, e livelli inferiori nei tessuti adulti come cervello e muscolo scheletrico. L'isoforma 1 è assente nel cervello, nel muscolo scheletrico e nelle PBMC.
• Le modificazioni post-traduzionali, tra cui la fosforilazione e la citrullinazione, possono influenzare la stabilità e l'attività della DNMT3B; la proteina è inoltre soggetta a coniugazione con molecole simili all'ubiquitina.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 206–360 della DNMT3B umana, una regione che contiene parte del dominio PWWP; verificare l'espressione delle isoforme funzionali nel sistema campione per garantire il rilevamento.
• Per il Western blot (WB), si prevede una banda vicina a 96 kDa; convalidare la specificità utilizzando controlli con knockout o knockdown di DNMT3B, poiché alcune isoforme possono migrare a dimensioni differenti.
• Per la ChIP, ottimizzare attentamente il crosslinking, la frammentazione e la concentrazione dell'anticorpo, poiché la DNMT3B è una proteina nucleare associata alla cromatina; includere regioni negative appropriate.
• Per l'ELISA, generare una curva standard con l'immunogeno ricombinante per valutare la linearità; l'anticorpo può essere utilizzato anche per la cattura o il rilevamento in un ELISA sandwich con coppie compatibili.
• Poiché la DNMT3B è espressa a bassi livelli in molti tessuti, prendere in considerazione l'arricchimento della frazione nucleare o un elevato caricamento proteico per un rilevamento sensibile.
• Non è stata riportata reattività crociata con specie non umane; convalidare nel sistema pertinente se utilizzato al di fuori di campioni umani.

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