Anticorpo monoclonale di coniglio anti-dopamina beta-idrossilasi per WB ed ELISA - P09172

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della dopamina beta-idrossilasi

• Identità della proteina: la dopamina beta-idrossilasi (DBH), nota anche come dopamina beta-monoossigenasi, è codificata dal gene DBH nell'uomo e appartiene alla famiglia delle monoossigenasi di tipo II dipendenti dal rame e dall'ascorbato.
• Funzione principale: la DBH catalizza l'idrossilazione della dopamina a noradrenalina (norepinefrina), una fase fondamentale della via biosintetica delle catecolamine, regolando così l'equilibrio dei neurotrasmettitori.
• Famiglia genica: la DBH è un membro della famiglia delle monoossigenasi; nel genoma umano non sono descritti paraloghi strettamente correlati, evidenziandone il ruolo unico nella produzione delle catecolamine.
• Localizzazione subcellulare: la DBH è localizzata principalmente nel lume e nella membrana delle vescicole secretorie, in particolare nei granuli cromaffini, ma può anche essere secreta nello spazio extracellulare in seguito all'esocitosi.
• Modificazioni post-traduzionali e cofattori: in quanto glicoproteina, la DBH è sottoposta a un'estesa N-glicosilazione, contiene ponti disolfuro essenziali per la stabilità strutturale e richiede ioni rame e vitamina C (ascorbato) come cofattori per la sua attività ossidoreduttasica.
• Peso molecolare: il peso molecolare calcolato del precursore non glicosilato è di circa 69.065 Da, in accordo con la banda di circa 69 kDa osservata mediante SDS-PAGE in condizioni riducenti.
• Associazioni patologiche: variazioni genetiche e mutazioni nella DBH sono state associate all'ipotensione ortostatica e ad altri disturbi, sottolineandone la rilevanza clinica (indicata dalla parola chiave "Disease variant" in UniProtKB).
• Note aggiuntive: la DBH è inoltre identificata come proteina secreta e come elemento del proteoma di riferimento; la sua struttura tridimensionale è stata determinata e sono disponibili dati di sequenziamento diretto della proteina, a ulteriore conferma della sua caratterizzazione biochimica.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Applicazione Western blot: l'anticorpo rileva una banda intorno ai 69 kDa nei campioni umani; si consiglia di utilizzare condizioni riducenti e di validare il segnale in tessuti o tipi cellulari noti per esprimere la DBH, come la midollare surrenale o i neuroni simpatici.
• Progettazione dell'immunogeno: il frammento ricombinante comprendente gli amminoacidi 100–250 corrisponde a una regione conservata all'interno del dominio catalitico. L'anticorpo può riconoscere sia la forma luminale matura sia l'eventuale precursore associato alla membrana presente nel lisato.
• Considerazioni per l'ELISA: nello sviluppo di immunodosaggi a sandwich, verificare la compatibilità dell'abbinamento con un anticorpo di cattura adeguato. Poiché la DBH è secreta, un'attenta selezione del tipo di campione (ad es. plasma o terreno condizionato) e delle fasi di preincubazione può migliorare il rilevamento.
• Reattività crociata: sebbene sia documentato che l'anticorpo reagisce con la DBH umana, la potenziale reattività crociata con altre specie o isoforme della DBH deve essere verificata indipendentemente, soprattutto se si prevedono applicazioni quantitative.
• Preparazione del campione: a causa della doppia localizzazione della DBH nelle membrane e nei lumi vescicolari, possono essere necessarie strategie di solubilizzazione (ad es. detergenti delicati) o il frazionamento subcellulare per ottenere un segnale ottimale nei saggi in fase solida.

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