Anticorpo policlonale di coniglio anti-EGFR [validato KD] per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P00533

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di EGFR

• Il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR), denominato anche proto-oncogene c-ErbB-1 e recettore tirosin-chinasi erbB-1, è codificato dal gene EGFR (nomi alternativi: ERBB, ERBB1, HER1).
• Funziona come recettore tirosin-chinasi che lega i ligandi della famiglia EGF (EGF, TGFA, AREG, EPGN, BTC, EREG, HBEGF) per indurre la dimerizzazione del recettore e l'autofosforilazione, attivando così le principali vie di segnalazione a valle tra cui RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC, STAT e potenzialmente NF-κB (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960, PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029, PubMed:11116146). Riferimenti correlati: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960 PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029 PMID:11116146
• Fosforila direttamente gli effettori a valle come RGS16 (aumentandone l'attività GTPasi e collegandolo alla segnalazione GPCR) e MUC1 (promuovendo le interazioni tra SRC e CTNNB1) e regola positivamente la migrazione cellulare tramite interazione con CCDC88A/GIV (PubMed:11602604, PubMed:11483589, PubMed:20462955). Riferimenti correlati: PMID:11602604 PMID:11483589 PMID:20462955
• Una isoforma di splicing alternativa (isoforma 2) può funzionare come antagonista della segnalazione mediata da EGF.
• La localizzazione subcellulare include membrana cellulare, reticolo endoplasmatico, apparato di Golgi, nucleo, endosomi e forme secreti, che riflettono il suo traffico dinamico e i ruoli nella segnalazione.
• È espresso ubiquitariamente nei tessuti umani, mentre l'isoforma 2 è rilevata in modo particolare nei tumori ovarici.
• Classificato come proto-oncogene, tirosin-chinasi proteica e glicoproteina transmembrana; funge anche da recettore della cellula ospite per l'ingresso del virus dell'epatite C (HCV), facilitandone l'internalizzazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, glicosilazione, idrossilazione, metilazione, palmitoilazione e coniugazione ubiquitino-simile, come indicato dalle parole chiave di UniProt.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (aa 1021–1210) si trova all'interno del dominio C-terminale intracellulare; pertanto l'anticorpo può rilevare sia frammenti full-length che C-terminali. Verificare la specificità in lisati cellulari o campioni tissutali rilevanti.
• Per il Western blotting è prevista una banda intorno ai 134 kDa; tuttavia, glicosilazione e fosforilazione possono causare spostamenti di mobilità. Includere marcatori di peso molecolare e convalidare con controlli positivi e negativi per EGFR.
• Per IHC-P, il recupero standard dell'antigene (es. tampone citrato pH 6.0) e i protocolli di bloccaggio devono essere ottimizzati; eseguire test con tessuti noti positivi (es. pelle, placenta) e negativi (es. knockout).
• In IF/ICC, i metodi di fissazione (PFA vs metanolo) influenzano la colorazione di membrana di EGFR; si raccomanda la rilevazione in parallelo con un marcatore di membrana.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevazione; le condizioni di saggio (concentrazione di rivestimento, bloccaggio) richiedono un'ottimizzazione individuale.
• La reattività crociata è riportata per campioni umani; se utilizzato in altre specie, verificare la reattività in modo indipendente a causa di possibili variazioni di sequenza.

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