Anticorpo monoclonale anti-EHHADH per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q08426

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di EHHADH

• Codificato dal gene EHHADH, l'enzima bifunzionale perossisomiale (noto anche come proteina L-bifunzionale, MFE1) è un enzima trifunzionale essenziale per la β-ossidazione perossisomiale degli acidi grassi a catena lunga e a catena ramificata.
• Possiede attività di 2-enoil-CoA idratasi, 3-idrossiacil-CoA deidrogenasi e delta3-delta2-enoil-CoA isomerasi, catalizzando due delle quattro reazioni della via metabolica (per similarità).
• Insieme a HSD17B4, catalizza l'idratazione del trans-2-enoil-CoA e la deidrogenazione del 3-idrossiacil-CoA con specificità chirale opposta, contribuendo alla degradazione degli acidi dicarbossilici (PubMed:15060085).
  Riferimenti correlati:
  PMID:15060085
• È inoltre in grado di isomerizzare sia i doppi legami 3-cis sia quelli 3-trans nella forma 2-trans in una gamma di specie enoil-CoA, mostrando un'attività isomerasica ottimale per i doppi legami 2,5 (per similarità).
• È localizzato esclusivamente nel perossisoma, riflettendo il suo ruolo nel metabolismo lipidico perossisomiale.
• È espresso prevalentemente nel fegato e nei reni, con una forte espressione nei segmenti terminali del tubulo prossimale; quantità inferiori sono presenti nel cervello.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione; lo splicing alternativo genera molteplici isoforme.
• Agisce come regolatore chiave dei livelli degli acidi grassi dicarbossilici a catena media, influenzando le vie complessive di ossidazione degli acidi grassi (per similarità).

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 110-284 all'interno del dominio idratasi; l'anticorpo può riconoscere sia le proteine a lunghezza completa sia le proteine isoformiche.
• Per il Western blotting, utilizzare lisati cellulari totali ottenuti da tessuto epatico o renale umano, oppure da linee cellulari con espressione di EHHADH confermata; è prevista una banda intorno a 79 kDa.
• Nell'immunoistochimica (paraffina), considerare il recupero antigenico indotto dal calore e prevedere un pattern di colorazione puntiforme specifico dei perossisomi.
• Per l'immunofluorescenza è necessaria la permeabilizzazione per visualizzare la localizzazione perossisomiale; la co-colorazione con marcatori perossisomiali può confermare la specificità.
• Convalidare le prestazioni dell'anticorpo nella propria matrice di campione specifica e ottimizzare sperimentalmente le diluizioni, poiché i pattern di colorazione raccomandati possono variare in base alla fissazione e alla lavorazione.

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